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目的:用鼠H1N1流感病毒株感染小鼠巨噬细胞Raw264.7,以细胞增殖周期、SOD活性和MDA水平以及TLR3介导的信号通路为研究切入点,探讨黄芪注射液及黄芪水煎剂对细胞增殖周期、SOD活性和MDA水平以及TLR3信号通路中免疫相关因子TLR3、TAK1、TBK1、IRF3、IFN-β在蛋白表达水平的影响,从细胞和分子水平上明确黄芪的抗病毒作用机制。方法:采用MTT分析法测定黄芪注射液及黄芪水煎剂对小鼠巨噬细胞Raw264.7增殖的影响和细胞毒性,确定相应ICO、IC10、IC25及对应浓度药物的体外抗病毒活性,以明确抗病毒机制研究的给药浓度;采用流式细胞术检测黄芪注射液及黄芪水煎剂干预72h时感染流感病毒细胞的周期变化情况以及细胞死亡情况;采用SOD、MDA检测法测定黄芪注射液及黄芪水煎剂干预72h对流感病毒感染细胞内SOD值与MDA值的影响;利用Western Blot技术测定黄芪注射液及黄芪水煎剂在有无流感病毒感染时对细胞内免疫相关因子TLR3、TAK1、TBK1、IRF3及IFN-β蛋白表达的影响。结果:MTT结果显示,不同浓度的黄芪注射液及黄芪水煎剂对细胞增殖有不同的影响:作用细胞24h时,黄芪注射液从400 mg/ml浓度开始显示出对细胞增殖的抑制作用,400及800 mg/ml浓度的抑制率分别为2.58%及47.43%;黄芪水煎剂从50 mg/ml浓度开始显示出对细胞增殖的抑制作用,50、100、200及400 mg/ml浓度的抑制率分别为 2.70%、17.20%、29.69%及 79.57%。作用细胞 48h 时,黄芪注射液 25、50、100、200、400 及 800 mg/ml 浓度的抑制率分别为 3.90%、15.90%、18.2%、19.20%、21.03%及 69.98%;黄芪水煎剂从50 mg/ml浓度开始显示出对细胞增殖的抑制作用,50、100、200及400 mg/ml浓度的抑制率分别为0.84%、10.67%、49.95%及88.61%。作用细胞72h时,黄芪注射液 25、50、100、200、400 及 800 mg/ml 浓度的抑制率分别为 3.19%、19.88%、27.68%、34.92%、69.77%及 82.40%;黄芪水煎剂 12.5、25、50、100、200 及 400 mg/ml 浓度的抑制率分别为 3 8.57%、58.92%、69.60%、66.60%、84.61%及 96.34%。用 SPSS Statistics 20统计软件计算出药物相应ICO、IC10及IC25,黄芪注射液对小鼠巨噬细胞Raw264.7作用72h的ICO为9.5 mg/ml、IC10为40 mg/ml、IC25为92 mg/ml,黄芪水煎剂对小鼠巨噬细胞 Raw264.7 作用 72h 的 IC0 为 0.2 mg/ml、IC10 为 1.6 mg/ml、IC25 为 5 mg/ml;体外的抗病毒实验结果显示,9.5 mg/ml（IC0）浓度的黄芪注射液与0.2 mg/ml（IC0）浓度的黄芪水煎剂表现出的抗流感病毒活性较为显著。流式细胞术结果显示,鼠H1N1流感病毒株感染小鼠巨噬细胞Raw264.7后会影响细胞周期,阻止细胞向S期转化使细胞阻滞在G1期;与病毒对照组相比,黄芪注射液与黄芪水煎剂各剂量组均可改善流感病毒感染后对细胞周期的阻滞作用,降低G1期细胞比例,升高S期细胞比例。SOD及MDA含量检测结果显示,鼠H1N1流感病毒株感染后与空白对照组相比小鼠巨噬细胞Raw264.7细胞SOD活力下降,脂质过氧化产物MDA含量升高;加药干预后,各剂量组黄芪注射液与0.2 mg/ml浓度的黄芪水煎剂与病毒对照组相比SOD活力升高、MDA含量下降。Western Blot实验结果显示,鼠H1N1流感病毒株感染小鼠巨噬细胞Raw264.7后,可增加TLR3、TAK1、TBK1、IRF3、IFN-β的蛋白表达量。加药干预后,与病毒对照组相比,9.5 mg/ml浓度的黄芪注射液可降低TLR3、TAK1、TBK1、IRF3、IFN-β蛋白表达量;40 mg/ml浓度的黄芪注射液可降低TLR3蛋白表达量,升高IFN-β蛋白表达量;92 mg/ml浓度的黄芪注射液可降低TLR3、TAK1、TBK1、IRF3蛋白表达量,升高IFN-β蛋白表达量;0.2 mg/ml浓度的黄芪水煎剂能降低TAK1、IFN-β蛋白的表达量,升高TLR3、TBK1、IRF3蛋白表达量;1.6 mg/ml浓度的黄芪水煎剂能升高TLR3、TBK1、IRF3、IFN-β蛋白表达量,降低TAK1蛋白表达量;5 mg/ml浓度的黄芪水煎剂可升高TLR3、TAK1、TBK1、IRF3、IFN-β蛋白表达量。结论:黄芪注射液及黄芪水煎剂均显示出明显的体外抗流感病毒活性,可提高鼠H1N1流感病毒株感染后的小鼠巨噬细胞Raw264.7存活率;其机制为调控鼠H1N1流感病毒株感染后细胞增殖周期及细胞内SOD、MDA含量,此外,通过调节TLR3介导的信号通路中免疫相关因子TLR3、TAK1、TBK1、IRF3、IFN-β蛋白水平的表达来影响机体的免疫系统,从而发挥其体外抗病毒作用。