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目的:
观察雌激素对不同阶段成骨细胞中caveolin-1(小凹蛋白-1)表达的影响,并研究caveolin-1在雌激素调节成骨细胞分化成熟过程中的作用。
方法:
将雌激素分别作用于增殖期(第2天)、分化期(第6天)、矿化期(第12天)的成骨细胞(MC3T3-E1)48小时,采用westernb lotting方法观察caveolin-1蛋白表达变化。对于分化期MC3T3-E1细胞,采用caveolin-1真核表达质粒Pcl-neo-cav-1上调caveolin-1表达后,观察其对雌激素调节成骨细胞代谢作用的影响,观察指标分别为细胞裂解液ALP活性(PNPP法)、培养上清骨钙素浓度(ELISA)以及成骨细胞特异性分化因子cbfa-1mRNA表达水平(RT-PCR)。最后,通过检测细胞培养基一氧化氮水平,探索caveolin-1作用机制。
结果:
1.雌激素可剂量依赖下调分化期MC3T3-E1细胞caveolin-1蛋白表达,对增殖期、矿化期细胞无明显影响。
2.雌激素可升高分化期MC3T3-E1细胞ALP的活性、培养基骨钙素浓度,上调cbfa-1mRNA表达。转染caveolin-1真核表达质粒Pcl-neo-cav-1取消上述雌激素作用(P<0.01)。各处理组中一氧化氮浓度无明显改变。
结论:
对分化期成骨细胞MC3T3-E1,Caveolin-1可负性调控雌激素的促分化作用,该作用不涉及一氧化氮途径。