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目的类风湿关节炎(RA)是一种以关节内炎性细胞浸润、滑膜增生和系统性炎症为主要特征的常见自身免疫性疾病,但迄今为止,其病因及发病机制尚不明确。近年来关于RA发病机制的研究表明,Th17细胞及其分泌的细胞因子在RA病程的各个阶段均发挥重要作用。Th17细胞是一群以分泌IL-17为特征的T细胞亚群,其可由CD4+幼稚性T细胞(Tn)和CD4+记忆性T细胞(Tm)诱导产生。尽管对Th17细胞在RA发病中的重要作用已有深刻认识,但人体内Th17细胞应答的条件尚不完全清楚,且此前研究多集中于体外细胞因子的调节作用,而人体是一个相互交错的免疫网络,多种免疫细胞如抗原体呈细胞(APC)可在Th17细胞应答中发挥重要作用。其中有文献报道,在RA患者关节病灶大量浸润的APC辅助下,Th17细胞可由CD4+Tm诱导产生,且此诱导作用依赖于APC和T细胞的直接接触,但具体机制不明。因此,探索RA炎症状态下参与调控APC诱导Th17细胞应答的具体分子及机制具有重要意义。CD147分子是一种膜表面蛋白,表达于所有免疫细胞表面,在活化T细胞表达上调,并在T细胞发育、活化、增殖、迁移、粘附和侵袭等功能中均发挥重要调节作用。此外,有研究报道CD147参与APC和T细胞间形成的免疫突触,进而调控T细胞的活化。近期的研究显示,cd147可通过抑制stat3信号抑制小鼠的th17细胞应答,但是由于人类和小鼠在th17细胞应答上存在诸多差异,cd147在人体内,尤其是ra炎症状态下,th17细胞应答中的调控作用仍有待研究。因此,为阐明cd147分子是否能通过调控th17细胞应答参与ra的发病,本课题研究了ra炎症环境下,cd147分子在apc诱导th17细胞应答中的调控作用及其可能机制。方法收集ra患者和健康对照外周血或滑液,采用流式细胞术检测cd4+cd161+t细胞及其分泌il-17和/或ifn-γ的细胞水平;以及cd4+t细胞、cd8+t细胞、cd19+b细胞、cd14+单核细胞(mo)、cd4+cd161+t细胞和cd4+ccr6+t细胞表面cd147的表达水平;并观察cd4+t细胞cd147表达与分泌il-17和ifn-γ的关系。应用luminex技术检测血浆中细胞因子il-17、il-1β、il-6、il-21和ifn-γ的水平。同时收集ra患者的基本信息、疾病活动度和临床检测指标。采用免疫磁珠法分离纯化健康对照和ra患者cd14+mo与cd4+t细胞(包括cd4+tn和cd4+tm),进行共培养诱导th17细胞应答,应用流式细胞术检测cd147单克隆抗体(mab)等条件干预时cd4+t细胞分泌il-17和/或ifn-γ的细胞水平;同时检测胞内pstat3、pakt(t308)、pakt(s473)、ps6和p70s6k的磷酸化信号水平。并应用luminex技术检测培养上清中il-17和ifn-γ的水平。应用c57bl/6小鼠构建胶原诱导关节炎(cia)模型,cd147mab治疗后,进行病理切片染色和关节炎评分,同时,收集cia小鼠外周血、脾脏和四肢引流淋巴结组织标本,采用流式细胞术检测分泌il-17和/或ifn-γ的cd4+t细胞水平。数据采用spss17.0和graphpadprism5.0软件进行统计描述和分析。p<0.05为差异具有统计学意义。结果1.ra患者外周血cd4+cd161+t细胞为分泌il-17的主要细胞,cd161+th17细胞比例显著高于th17细胞比例,且两者显著正相关。同时,ra患者cd4+cd161+t细胞和cd161+th17细胞比例显著升高,并与疾病活动度指标显著正相关。2.在ra患者和健康对照,th17细胞及其标记细胞cd4+cd161+和cd4+ccr6+t细胞均高表达cd147分子,且th17细胞比例可随着cd147表达升高而增加。3.明确在CD3mAb刺激条件下,CD4+Tm和脂多糖(LPS)活化的Mo以5:1比例共培养3天为诱导Th17细胞应答的最佳条件。在此共培养条件下,CD147mAb可特异性抑制体外LPS活化Mo诱导的Th17细胞产生和IL-17分泌。同时,CD147mAb可明显抑制CD4+Tm的pSTAT3、pAKT(T308)、pS6和p70S6K磷酸化水平。4.RA患者关节滑液中活化Mo可诱导自体CD4+Tm产生Th17细胞应答,且CD147mAb可特异性抑制病灶中活化Mo诱导产生的Th17细胞应答。5.CD147mAb特异性降低CIA小鼠脾脏和引流淋巴结中Th17细胞水平的同时,可显著改善CIA小鼠的关节红肿症状和平均关节炎指数,并减轻关节内炎细胞浸润、滑膜组织增生和软骨组织破坏。结论本研究进一步支持Th17细胞在RA发病中的重要作用,并提示CD4+CD161+T细胞和CD161+Th17细胞水平可作为判断RA病情活动度的细胞学指标。发现CD147分子表达水平与Th17细胞比例相关,且CD147可特异性调控RA炎性病灶中APC诱导的Th17细胞应答,其机制可能是通过CD147-AKT-mTORC1-STAT3信号途径。同时,小鼠体内实验结果表明,CD147mAb可能通过抑制体内Th17细胞应答进而改善CIA小鼠病情。因此,本课题揭示了CD147分子在APC诱导Th17细胞应答过程中的重要作用,及其调控的信号传导通路,并为后期开发靶向CD147治疗RA等Th17细胞相关自身免疫病的药物提供了一定理论依据。