目的:探讨视网膜母细胞瘤基因(Rb)对人骨肉瘤增殖、迁移和侵袭作用的影响,并从分子层面分析Rb分子对人骨肉瘤生物学性状的影响。方法:(1)检测Rb在正常成骨细胞(hFOB1.19)和骨肉瘤细胞系(U2-OS、Saos-2及MG-63)中RNA含量,同时检测Rb在正常骨组织和人骨肉瘤组织中表达量,比较其表达量差异。(2)选取Saos-2细胞,利用慢病毒构建Rb高表达和低表达模型,对照组转染空载体。检测高表达模型和低表达模型中Rb对骨肉瘤细胞增殖(CCK-8实验)、迁移(划痕实验)和侵袭(Transwell实验、qRT-PCR、Western-bolt)等生物学特性的影响。(3)慢病毒转染Saos-2骨肉瘤细胞后构建骨肉瘤裸鼠移植瘤动物模型,2周后开始测量和比较各组瘤体的体积和重量,qRT-PCR检测裸鼠瘤体内Rb和细胞绒毛蛋白基因(Ezrin)的表达量。结果:(1)qRT-PCR实验结果显示,Rb在人骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系中的表达量均较正常骨组织(P<0.001)和成骨细胞(P<0.001)中显著降低。(2)利用慢病毒载体来转染Saos-2骨肉瘤细胞,转染效率可达90%以上,并用qRT-PCR检测其表达(P<0.05)。(3)体外结果显示,Rb组可抑制骨肉瘤细胞增殖(p≤0.001)、迁移(p<0.005)和侵袭(p<0.005),Sh-Rb组可促进骨肉瘤细胞增殖(p<0.001)、迁移(p<0.05)和侵袭(p<0.001)。(4)体外qRT-PCR结果显示,Rb组可抑制Ezrin的mRNA表达(P<0.05),Sh-Rb组可促进Ezrin的mRNA表达(P<0.05)。(5)体外Western-bolt结果显示,Rb组可抑制Ezrin的蛋白表达(P<0.05),Sh-Rb组可促进Ezrin的蛋白表达(P<0.05)。(6)体内实验结果发现,Rb组裸鼠瘤体的体积(P<0.001)和重量(P<0.005)均小于Control组,Sh-Rb组裸鼠瘤体的体积(P<0.005)和重量(P≤0.005)均大于Control组。(7)瘤体qRT-PCR结果显示,Ezrin在Rb组中表达低于Control组(P<0.05),在Sh-Rb组中表达高于Control组(P<0.05)。结论:(1)差异性表达的Rb在骨肉瘤发生发展过程中发挥了重要作用。(2)Rb在体外水平可通过抑制骨肉瘤细胞系的增殖、迁移和侵袭来发挥抑癌作用。(3)Rb在体内水平可抑制骨肉瘤的形成和发展。(4)Ezrin与骨肉瘤的恶性度和侵袭度相关,而高表达Rb可抑制Ezrin的表达,低表达Rb可促进Ezrin的表达,因此,Rb可能在Ezrin的上游起调控作用。