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本研究通过用猪肾 PK15细胞作为细胞模型，分别构建了功能性 MSTN打靶载体和 TALEN效应蛋白表达载体，经电穿孔转染法将打靶载体导入猪肾PK15细胞，筛选获得了一个能稳定整合该载体、且 EGFP表达均一的单克隆细胞。然后针对打靶载体ΔMSTN上锚定的LoxP位点，设计 Cre重组酶表达载体(pTurbo-Cre)，在 MSTN打靶载体与 TALEN表达载体转入猪肾 PK15细胞，并筛选得到MSTN基因敲除单克隆细胞后，用 Cre-LoxP重组系统敲除选择标记基因，评价该系统的基因删除效率及定点置换率，为基因重组技术的研究利用提供新策略。 通过流式筛选分析（FACS）、荧光定量 PCR、TA克隆与测序等手段验证Cre-LoxP重组系统在猪细胞内介导内源性选择标记基因的删除效率，并取得了以下研究结果： 1.通过筛选得到了单克隆细胞系，这也验证了选择标记新霉素磷酸转移酶和 EGFP表达的有效性；在获得单克隆细胞系的基础上通过 Cre-LoxP介导的位点特异重组，验证了删除内源性选择标记表达框的可行性与效能。该单克隆细胞系的获得，证明了打靶载体上的选择标记基因能够有效表达，从而为检测删除反应提供了一个良好的细胞模型。 2.通过流式细胞仪测定各组总荧光表达强度 GFP-A-Mean水平。结果显示，空白组 Mock与阴性对照组 Neg.Ctrl荧光峰值、峰形相当，无明显变化；Cre-loxP组荧光峰形变窄，荧光强度下降比较明显。对各组荧光表达变化差异的分析结果显示，Cre-loxP组中 PK-ΔMSTN荧光细胞表达水平下降明显，荧光蛋白表达量的比例降到46.1％。 3.提取各实验组细胞 gDNA，经 Taq酶切检测和实时定量 PCR对 PK-ΔMSTN单克隆细胞基因组DNA中CMV-NeoR-IRES-EGFP表达框基因的检测发现，转染 Cre-loxP重组酶系统的 PK-ΔMSTN单克隆细胞基因组 DNA中的CMV-NeoR-IRES-EGFP基因数量明显下降，定量 PCR结果显示该系统对荧光蛋白基因的分子内删除水平达到97%。 4. PCR产物经切胶回收，TA克隆，筛选阳性重组子并测序。结果显示经过位点特异重组反应，选择标记表达框被删除，5ˊ和3ˊ同源臂之间仅残留一个34 bp的LoxP位点。此结果进一步证明Cre-LoxP位点特异重组系统在猪细胞内具有良好重组活性，该系统能够高效删除内源性选择标记表达框。 综上所述，本研究初步建立了可用于转基因猪研究的选择标记删除技术体系，为后续在基因打靶的基础上获取无选择标记的供体细胞开辟了可行的技术路线。