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天冬酰胺内肽酶(AEP)主要存在于溶酶体，参与溶酶体内容物的活化和降解，在细胞自噬过程中有重要作用。病理状态下，AEP表达上调、活化增加且能够移出溶酶体，与肿瘤、阿兹海默等多种疾病的发生、恶化相关。本文主要涉及两个方面的研究内容:肿瘤细胞中AEP对信号转导与转录激活因子3（STAT3）的剪切作用，及M2型巨噬细胞中AEP通过自噬调控NF-κB通路的机制。 首先，我们发现在人肿瘤细胞系和小鼠肿瘤组织中，AEP参与了STAT3的剪切过程;敲除AEP后，STAT3剪切片段减弱甚至消失。通过纯化蛋白进行体外切割实验，我们证实了AEP直接作用于STAT3。亚细胞组分分离结果则说明剪切过程主要在细胞溶质中进行。正常培养条件下，肿瘤细胞中AEP活化量较少，对STAT3的剪切作用较弱，STAT3的活化过程还受到其他分子通路的调控;AEP基因敲低后，STAT3活化的增强或减弱与细胞类型有关。蒽环类化疗药物阿霉素能够诱导AEP表达上调、活化增加，此时AEP大量剪切STAT3，同时STAT3活化受到抑制;敲低AEP后，STAT3的剪切减弱，STAT3活化的抑制作用随之减弱。这些结果说明在肿瘤细胞受到刺激，上调并活化AEP时，STAT3被剪切并抑制其活化。这提示了活化的AEP在肿瘤细胞中调控信号过程的酶活作用机理，为更好的研究肿瘤细胞中不同状态、不同定位的AEP的功能提供依据。 另外，AEP基因敲除鼠来源的M2型巨噬细胞经LPS激活后，细胞中磷酸化IKKα/β累积增多，导致NF-κB信号通路持续激活，AEP-/-M2巨噬细胞比WTM2巨噬细胞产生更强的炎症应答。通过细胞免疫荧光、分子筛色谱及亚细胞组分分离技术，我们发现AEP缺失的M2型巨噬细胞自噬功能障碍，p62蛋白形成聚集斑，使TRAF6 K63泛素化增强，并促使活化的IKK复合体转移到自噬溶酶体膜上，使活化的IKK复合体更加稳定，从而增强炎症信号通路。使用诱导剂增强自噬过程，活化的IKK减少;抑制自噬，活化的IKK相应增加。这些结果提示了自噬过程在IKK/NF-κB信号通路中发挥重要的调控作用。