推拿对小鼠昼夜节律紊乱及下丘脑内VIP-VPAC2的影响

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目的:探究推拿调节昼夜节律的时相特征及其干预对下丘脑内VIP、VPAC2受体的影响,为临床上推拿治疗昼夜节律紊乱相关疾病提供理论依据。方法:将24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组(C组)、模型组(M组)、推拿组(T组)和假推拿组(JT组),每组各6只。每只小鼠被单独饲养在隔离单元格内,首先进行为期1周的光/暗同步驯化(Light:8:00-20:00;Dark:20:00-08:00),接着将光照调为恒定黑暗,造模14天。应用Clock Lab系统实时监测和记录小鼠自发活动,包括起始活动时间、相位转移值、峰相位和总活动量。观察不同组别小鼠自发活动昼夜节律的时相变化。在推拿或假推拿干预5天后取出小鼠下丘脑组织,应用Elisa检测VIP含量、PCR检测Per2 mRNA表达及Western Blot检测VPAC2受体蛋白表达。采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析,主要采用两因素重复测量方差分析、单因素方差分析和非参数检验,用Graph Pad Prism 9.0软件绘图,以P<0.05具有统计学意义。结果:1.一般情况观察:造模后小鼠体重稍有增加,未见毛发脱落、皮毛不光泽等现象,表现出精神亢奋,行为反应更为敏捷。T组和JT组小鼠精神状态、行为反应敏捷度逐渐恢复,T组略优于JT组。2.小鼠自发活动昼夜节律时相特征:造模后起始活动时间和峰相位均提前,差异具有统计学意义(P<0.05)。推拿干预后,小鼠起始活动时间和峰相位延后,相位转移值减小,差异具有统计学意义(P0.05)。3.VIP含量水平:与C组相比,M组VIP浓度下降,两者差异具有统计学意义(P<0.05);与M组相比,T组VIP浓度上升,差异具有统计学意义(P0.05)。4.VPAC2受体蛋白表达结果:与C组相比,M组VPAC2受体蛋白表达上升,两者差异具有统计学意义(P<0.05);与M组相比,T组VPAC2受体蛋白表达下降,差异具有统计学意义(P0.05)。5.Per2 mRNA的表达情况:与C组相比,M组Per2 mRNA表达下降,两者差异具有统计学意义(P<0.05);与M组相比,T组Per2mRNA表达上升,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1.在LD条件下,各组小鼠的自发活动均表现出稳定的昼夜节律,而在DD条件下,其自发活动表现出超前性转移;2.推拿能调整小鼠的自发活动昼夜节律相位,表现为起始活动时间和峰相位延后,相位转移值减少,而总活动量无明显变化;3.推拿可能通过上调VIP、下调VPAC2受体表达,使Per2 mRNA表达升高,从而促进小鼠昼夜节律的恢复。
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