论文部分内容阅读
目的探究人肺癌组织和正常组织中，MCPH1基因所编码的蛋白在这两种组织中的表达分布差异；转染MCPH1基因真核表达载体（pcDNA3.1-MCPH1）至人肺癌细胞中，并探讨MCPH1基因过表达后对肺癌细胞凋亡的影响。方法第一阶段：收集188例人临床肺癌组织标本和正常肺组织标本20例，制成石蜡切片，免疫组织化学法检测MCPH1蛋白在肺癌组织和正常（癌旁）肺组织中的表达分布差异。第二阶段：酶切鉴定pcDNA3.1-MCPH1重组质粒载体；以脂质体2000为转染载体，将重组质粒pcDNA3.1-MCPH1瞬时转染A549和H1299人肺癌细胞株，采用RTFQ PCR法检测各组细胞中MCPH1基因的mRNA转录表达情况，Western blot检测各组细胞中MCPH1基因蛋白表达量，通过流式细胞仪检测各组细胞凋亡的情况。结果：MCPH1蛋白在肺癌组织中表达低于正常组织（P=0.002），在癌细胞类型中，MCPH1蛋白在肺腺癌中的表达量要高于肺鳞癌（P=0.002），而且MCPH1蛋白在癌组织中主要为胞浆表达，在正常组织中主要为核质表达（P=0.002）；采用双酶切法证实重组质粒pcDNA3.1-MCPH1构建成功；构建成功的真核重组质粒载体分别转染肺癌株A549和H1299，可有效上调这两种细胞中MCPH1基因的mRNA和蛋白表达，而且两种细胞的凋亡率较未处理组和阴性对照组均明显升高：H1299处理组的细胞凋亡率（18.10±1.87）％较阴性对照组（5.76±1.85）％和未处理组（5.85±0.57）％显著增加（P＜0.05），A549处理组细胞凋亡率［（16.82±1.29）％］较阴性对照组［（6.27±0.88）％］和未处理组［（5.36±0.43）％］明显增加（P＜0.05）。结论：MCPH1基因在人肺癌组织中表达显著降低，而在人正常肺组织中呈现高丰度表达；在癌组织中，MCPH1蛋白在肺腺癌中的表达量要高于其在肺鳞癌中的表达量；在细胞中，MCPH1蛋白在癌细胞中为主要为胞浆表达，在正常组织细胞中主要为核质表达；MCPH1基因在癌细胞中过表达能够诱导人肺癌细胞的凋亡，为进一研究MCPH1基因在肺癌细胞凋亡中的作用及其机制奠定了基础。