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目的:在结肠炎相关性结直肠癌(Colitis-Assosiated Colorectal Cancer,CAC)的发生发展过程中,miRNAs和IL-6/STAT3炎症信号通路起着非常重要的作用。然而,CAC的病理机制尚不清晰,特别是在CAC的发展过程中,miRNAs及其靶基因与IL-6/STAT3信号通路之间的关系缺乏深入研究。因此,本实验首先筛选并验证与CAC相关的关键miRNAs—miR-29a;其次,探讨miR-29a的效应靶基因及其与IL-6/STAT3的相关性,揭示二者在CAC发病进程中的分子机制;最后,针对上述效应指标探讨救必应的有效成分长梗冬青苷的干预机制。方法:采用氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)方法建立C57BL/6小鼠CAC模型,miRCURY LNATM miRNAs芯片检测对照组和CAC模型小鼠中miRNAs的差异表达,筛选出差异miRNAs;针对上述筛选的差异miRNAs,在临床患者及模型动物样品中采用RT-PCR进行验证;RT-PCR检测TET1、TET2、TET3mmRNA的表达;免疫荧光法测定模型动物结肠组织和HCT-116、IEC-6细胞体系mmiR-29a转染后中5-hmc和TET1的表达;用Western-Blot法检测TET3、STAT3和P-STAT3蛋白的表达水平;MTT检测长梗冬青苷对肿瘤细胞增殖的作用及相关蛋白的干预作用。结果:1.采用C57BL/6小鼠一次性腹腔注射AOM,结合3%的DSS溶液自由饮用循环刺激的方法进行造模,8周(8w)后模型小鼠结肠粘膜出现中、重度异型增生并且伴随着大量炎细胞的浸润,miRNAs测序结果显示,CAC模型结肠组织中miR-29a的表达明显升高;根据测序结果进行RT-PCR验证发现,CAC小鼠模型结肠组织、人结肠癌(手术样本)结肠组织以及结肠癌细胞系HCT-116细胞中,miR-29a的表达水平均明显高于正常小鼠结肠组织,人的癌旁结肠组织(手术样本)和IEC-6细胞。2.在CAC小鼠模型和人的结肠癌组织中,STAT3、P-STAT3蛋白表达水平均显著升高,而TET3mRNA和TET3蛋白的表达水平下降,免疫荧光法显示CAC模型小鼠结肠粘膜中5-hmc和TET1的表达低于正常组。3.体外研究显示:结肠细胞系HCT-116、IEC-6、巨噬细胞RAW264.7转染miR-29a precursor使其高表达后,STAT3蛋白表达增加;TET3mRNA表达下降(IEC-6和HCT-116);TET3 蛋白表达减少(HCT-116);5-hmc 和 TET1 表达降低(IEC-6 和 HCT-116)。转染miR-29a抑制剂,结肠细胞(HCT-116和IEC-6)中STAT3蛋白表达降低,TET3mmRNA表达升高(IEC-6和HCT-116)。采用IL-6(50 ng/ml)刺激肠上皮细胞(HCT-116和IEC-6)24h,TETs(TET1,TET2,TET3)mRNA 降低,STAT3 蛋白表达增加(HCT-116、IEC-6、RAW264.7)。而且 IL-6(50ng/ml)刺激 24h 可增加细胞 miR-29a 水平;应用STAT3抑制剂可逆转HCT-116细胞中IL-6引起的miR-29a的升高。4.长梗冬青苷可降低CAC小鼠模型中miR-29a水平、STAT3蛋白的表达,促进TET3蛋白的表达,体外抑制HCT-116的增殖,长梗冬青苷10μM刺激12h后可逆转HCT-116细胞中miR-29a precursor引起TET3蛋白表达的下降。结论:结果表明,miR-29a/STAT3细可能在结肠炎相关性结直肠癌进程中形成了一个正反馈,其中miR-29a激活了 IL-6/STAT3信号通路,使STAT3蛋白和P-STAT3蛋白表达增加,同时,IL-6/STAT3进一步诱导巨噬细胞及结肠上皮胞中miR-29a的表达,加剧抑制TET3mRNA和TET3蛋白的表达,miR-29a/STAT3互相作用放大了炎症效应,从而参与结肠炎-癌的发生发展过程。长梗冬青苷的干预作用可能与其抑制miR-29a/STAT3中关键分子有关。