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目的研究生物标志物CD133、cyclinB1、DNA-PKcs、EGFR、FHIT、Id2、Ki-67、LRP16及NF-κB在胃癌组织中的表达并探讨其与肿瘤生物学特性及患者术后生存时间(即总体生存时间)的关系。寻找与胃癌预后相关的新的分子标记物,以期为临床治疗提供更多的信息,减少复发与转移。方法(1)采集解放军总医院病理科1998-2001年间实施手术切除并有完整随访资料的胃癌病例336例,手工制成组织芯片11块,进而采用PV6000二步法检测胃癌相关标志物CD133、cyclinB1、DNA-PKcs、EGFR、FHIT、Id2、Ki-67、LRP16及NF-κB在胃癌组织中的表达,分析其与临床病理特征及患者预后的关系。(2)HER-2基因扩增的检测:运用荧光原位杂交(fluorescence in situhybridization,FISH)技术,用HER-2探针和17号染色体着丝粒特异性探针,检测72例胃癌患者HER-2基因扩增情况,分析其与HER-2蛋白表达的关系。(3)胃癌细胞的培养及荧光免疫细胞化学染色:采用细胞培养技术,培养胃癌SGC-7901、MGC-803细胞,经Hoechst33342、荧光免疫细胞化学染色等方法,在荧光显微镜下检测SP(side population)细胞的比例,比较ABCG2、CD133、CK20、cyclinB1及DNA-PKcs在SP细胞与非SP细胞中表达的差异。结果(1)CD133、cyclinB1、EGFR、Id2、Ki-67、LRP16及NF-κB的表达均随肿瘤浸润程度加深而增高(P＜0.05),而DNA-PKcs、FHIT的表达则随浸润程度加深而降低(P＜0.05);CD133、cyclinB1、EGFR、Id2、Ki-67及NF-κB的表达随淋巴结转移数目增多而增高(P＜0.05),而DNA-PKcs的表达则随淋巴结转移数目增多而降低(P=0.031);CD133、cyclinB1、Id2、Ki-67及NF-κB在有腹腔及远处转移组的表达均明显高于无转移组(P＜0.05),而DNA-PKcs在有腹腔及远处转移组的表达则低于无转移组(P=0.008);CD133、cyclinB1、EGFR、Id2、Ki-67及NF-κB的表达均随TNM分期递增而增高(P＜0.05),而DNA-PKcs、FHIT的表达则随TNM分期递增而降低(P＜0.05);CD133、cyclinB1、EGFR、Id2、Ki-67及NF-κB的表达随肿瘤分化程度的降低而增高(P＜0.05),而FHIT的表达则随肿瘤分化程度的降低而降低(p=0.006),DNA-PKcs和LRP16在中分化胃癌中的表达高于高、低分化胃癌(P＜0.05)。(2)CD133、cyclinB1、EGFR、Id2、Ki-67、LRP16及NF-κB在癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P＜0.05);而FHIT在癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织(P＝0.005);DNA-PKcs在癌和正常组织中的表达无显著性差异(p＝0.723)。(3)单因素术后生存分析显示:CD133、cyclinB1、DNA-PKcs、EGFR、FHIT、Id2、Ki-67、NF-κB、发病年龄、肿瘤大小、分化程度、组织学类型、浸润深度、淋巴结转移、腹腔及远处转移、TNM分期和术后是否进行放化疗(chemoradiotherapy,CRT)这17种因素与患者的术后生存时间相关(P＜0.05)。(4)Cox多因素生存分析显示:CD133、EGFR、Id2、Ki-67阴性表达、DNA-PKcs阳性表达、患者年轻、肿瘤体积小、管状腺癌及未发生淋巴结及远处转移、有CRT的患者术后生存时间长,预后较好(P＜0.05)。(5)在随机抽取的72例胃癌组织中检测HER-2蛋白的表达及HER-2基因的扩增,HER-2蛋白表达仅7例(9.72%),其中HER-2基因扩增2例(2.78%);另收集HER-2阳性表达的胃癌19例,其中7例(36.84%)为HER-2基因扩增阳性。HER-2基因扩增与HER-2蛋白表达无关(P=0.636)。(6)胃癌SGC-7901细胞株经Hoechst33342和荧光免疫细胞化学染色显示:SP细胞的比例为3.8%:SP细胞中ABCG2和CK20的阳性率显著低于非SP细胞(P＜0.05);CD133、cyclinB1和DNA-PKcs在SP细胞和非SP细胞中的表达无显著性差异(P＜0.05)。(7)胃癌MGC-803细胞株经Hoechst33342和荧光免疫细胞化学染色显示:SP细胞的比例为2.9%;SP细胞中cyclinB1的阳性率显著高于非SP细胞(P＜0.05);SP细胞中ABCG2、CD133、CK20及DNA-PKcs的阳性率显著低于非SP细胞(P＜0.05)。结论(1)CD133、cyclinB1、DNA-PKcs、EGFR、FHIT、Id2、Ki-67及NF-κB在胃癌的表达情况与患者的术后生存时间相关。(2)CD133、DNA-PKcs、EGFR、Id2、Ki-67、患者年龄、肿瘤大小、组织学类型、淋巴结转移、腹腔及远处转移及CRT是胃癌术后生存时间的独立预后因子。(3)CD133、cyclinB1、EGFR、Id2、Ki-67、LRP16及NF-κB在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,而FHIT在癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织,这些标志物可能在胃癌的发生发展中起着重要作用。(4)在随机抽取的胃癌组织中HER-2蛋白表达率及HER-2基因扩增率,分别为9.72%和2.78%;在收集的HER-2阳性表达的胃癌中HER-2基因扩增率为36.84%。胃癌HER-2基因扩增与HER-2蛋白表达无关。(5)胃癌SGC-7901和MGC-803细胞株中SP细胞的比例分别为3.8%和2.9%;CK20~-/cyclinB1~+或CD133~+可能是胃癌癌干细胞的特异性分子标志物,而单纯ABCG2、CD133、cyclinB1及DNA-PKcs在鉴定胃癌癌干细胞时无特异性,此初步结果需进一步探讨。