【摘 要】
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目的评估丹参酮ⅡA对人胎盘间充质干细胞(h PDMSCs)向心肌细胞分化及对预分化细胞归巢能力的影响,并探讨其相关机制。方法1、应用组织块分离法培养h PDMSCs,使用流式细胞术进行相关抗原的鉴定。2、取第4-6代的h PDMSCs,分别用不同浓度的丹参酮ⅡA进行干预,MTS法每四天进行细胞增殖检测,选择对细胞增殖没有影响的无毒剂量(从没有到有影响的临界浓度)进行实验。3、使用丹参酮ⅡA、丹参酮
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目的评估丹参酮ⅡA对人胎盘间充质干细胞(h PDMSCs)向心肌细胞分化及对预分化细胞归巢能力的影响,并探讨其相关机制。方法1、应用组织块分离法培养h PDMSCs,使用流式细胞术进行相关抗原的鉴定。2、取第4-6代的h PDMSCs,分别用不同浓度的丹参酮ⅡA进行干预,MTS法每四天进行细胞增殖检测,选择对细胞增殖没有影响的无毒剂量(从没有到有影响的临界浓度)进行实验。3、使用丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡA+β-catenin激动剂WAY-262611干预h PDMSCs,同时设置不加药的对照组,每四天换一次液,MTS法检测细胞的增殖情况。4、使用丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡA+β-catenin激动剂WAY-262611干预h PDMSCs,同时设置不加药的对照组,20天时使用细胞划痕法检测细胞迁移运动情况。5、使用丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡA+β-catenin激动剂WAY-262611干预h PDMSCs,同时设置不加药的对照组,每四天换一次液,20天时收集细胞,使用Western-blot法进行以下相关蛋白的检测:(1)细胞周期调节蛋白(CDK4、CDK6、Cyclin D1)、细胞增殖相关抗原(Ki67、PCNA)和细胞凋亡调控蛋白(Caspase-3、Cleaved Caspase-3)的表达情况;(2)心肌特异性蛋白(GATA-4、ANP、α-SCA、c Tn I)的表达情况;(3)经典Wnt信号通路相关蛋白(APC、Gsk-3β、β-catenin)和非经典Wnt信号通路相关蛋白(Wnt5a、Wnt11)的表达情况;(4)与归巢相关的趋化因子(CXCR-4、CCR-2)的表达情况。结果1、应用组织块分离法成功分离培养出h PDMSCs。2、与对照组相比,经丹参酮ⅡA处理的细胞增殖速度明显降低,但这种降低并不伴有细胞凋亡的变化,其细胞凋亡调控蛋白(Caspase-3、Cleaved Caspase-3)的表达没有明显变化(P>0.05),而细胞增殖相关抗原(Ki67、PCNA)和细胞周期调节蛋白(CDK4、CDK6、Cyclin D1)的表达明显减少(P<0.05)。3、与对照组相比,经参酮ⅡA处理的细胞,其心肌特异性蛋白GATA-4、ANP、α-SCA、c Tn I的表达明显增加(P<0.05),且向损伤区迁移的能力明显增强(P<0.05)。4、与对照组相比,经参酮ⅡA处理的细胞,其经典Wnt信号通路中的APC、Gsk-3β的表达明显增多(P<0.05),而β-catenin的表达明显减少(P<0.05),非经典Wnt信号通路中Wnt5a、Wnt11的表达也明显增加(P<0.05);同时,与归巢相关的趋化因子CXCR-4、CCR-2的表达也明显增多(P<0.05)。5、在增加β-catenin激动剂WAY-262611干预后,细胞增殖速度明显增快,细胞增殖相关抗原(Ki67、PCNA)和细胞周期调节蛋白(CDK4、CDK6、Cyclin D1)的表达明显增加(P<0.05);心肌特异性蛋白GATA-4、ANP、α-SCA、c Tn I的表达明显减少(P<0.05);同时,细胞向损伤区迁移的能力明显下降(P<0.05),与归巢相关的趋化因子CXCR-4、CCR-2的表达也明显减少(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA能够通过调控Wnt/β-catenin信号通路诱导h PDMSCs向心肌细胞分化、提高预分化细胞的归巢能力。
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