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目的本实验旨在探究电针百会穴、印堂穴、水沟穴的干预方法对6月龄APP/PS1双转基因小鼠的影响以及干预方法,以期为临床医治阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease)提出新的科学思路和客观的科学依据;并在此实验理论上,探寻电针百会穴、印堂穴、水沟穴的干预方法对6月龄的APP/PS1双转基因小鼠,进一步研究是否通过提高Klotho基因的表达,改良阿尔茨海默病(AD)小鼠模型的学习记忆能力,探究电针治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法首先选取6月龄的APP/PS1双转基因小鼠共20只,将小鼠随机分为电针治疗组、模型组,以10只C57BL/6野生鼠作为正常组;然后在电针组选取针刺百会穴和印堂穴,百会穴的针尖向后头部刺入、印堂穴的针尖向鼻尖方向刺入,进针2-3 mm。采取疏密波治疗,频率为1/50 Hz,强度为0.3 mA,持续20 min;以针柄震颤得气、动物尽量不挣扎、不嘶叫为度。电针结束后,电针组的小鼠点刺水沟穴,模型组、用相同的方法给正常组以相同方法用鼠袋束缚15 min,隔日1次,持续4周。采用Morris水迷宫的方法进行空间记忆行为学来测试各组小鼠空间学习记忆的能力,以定位航行试验的第四象限作为入水点的逃避潜伏时、穿越平台的次数和第三象限游泳路程作为评判小鼠学习记忆能力的指标。以免疫组化法来观察皮层Klotho的表达,RT-PCR法来检测皮层Klotho表达水平。并用SPSS20.0统计软件来进行统计学的处理。结果1.Morris水迷宫检测显示伴随着各组小鼠训练天数的逐渐增加,它们逃避潜伏的时间均缩短(P<0.05);与正常组来相比,模型组逃避潜伏时间延长;与模型组相比,电针组小鼠逃避潜伏的时间明显逐渐缩短。各组空间的探索实验穿越的平台次数和平台象限游泳距离均用ANOVA分析。与正常组相比,模型组穿越平台的次数和平台象限游泳路程明显减少。与模型组相比,电针组穿越平台的次数增加(P<0.05)。模型组与正常组比较逃避潜伏时均增加、空间探索实验穿越平台的次数、平台象限游泳的路程明显减少(P<0.05,P<0.01),电针治疗组逃避潜伏时明显减少(P<0.05)。2.电针对APP/PS1小鼠Klotho蛋白表达的影响正常组的Klotho细胞内和细胞外均有棕色阳性的表达,模型组Klotho表达为阳性,但和正常组比有明显的减少,仅在细胞内有表达。和模型组相比,电针组的Klotho表达明显增强。PCR结果显示Klotho的表达水平,模型组远远低于正常组(P<0.01),而电针组远远高于模型组(P<0.01)。3.电针对APP/PS1小鼠Klotho mRNA表达的影响与正常组相比,模型组KlothomRNA相对表达量明显降低(P<0.01);与模型组相比,电针组Klotho mRNA相对表达量明显增加(P<0.01)。电针促进了大脑皮层Klotho mRNA表达。结论电针百会穴、印堂穴、水沟穴可大大改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力。电针治疗APP/PS1双转基因小鼠,可促进抗衰老基因Klotho的表达增强,其机制可能通过调节GluN2B,促进NMDA受体长期开启,以便接收信息,进而保持细胞间的信息交流,从而促进学习和记忆,对于防治阿尔茨海默病可能有良性的调节作用。