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背景和目的:近年来，中医在医学领域发挥着越来越重要的作用。很多学者已发现中医在治疗口腔疾病方面的可行性。中草药来源于天然植物，副作用小，不易使细菌产生耐药性。葡萄籽原花青素（GSPE）是一种纯天然的抗氧化剂，具有较强的抑菌作用。现研究表明牙龈卟啉单胞菌在牙髓、牙周疾病以及口臭的发生、发展中都发挥着重要作用。牙龈卟啉单胞菌是G-厌氧短杆菌，其分泌的内毒素（LPS）等毒力因子以及形成的生物膜（BBF）能够逃避宿主的免疫防御系统，破坏宿主牙周组织。目前GSPE对牙龈卟啉单胞菌抑制作用的研究鲜见报道。本实验拟通过GSPE对牙龈卟啉单胞菌的内毒素及生物膜的影响作用研究，探索GSPE在治疗口腔疾病方面的可行性，为研究开发预防牙周疾病以及口臭等方面的高效低毒的药物及相关性食品奠定理论基础。材料和方法:实验一：GSPE对牙龈卟啉单胞菌的最低抑菌浓度将牙龈卟啉单胞菌冻干菌在胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）内复苏，增菌以及继代培养，挑取培养好的菌株，用PBS缓冲液将菌液校正至0.5麦氏比浊标准的菌液备用。将GSPE用无菌去离子水配制原花青素溶液128mg/ml的原液，然后倍比稀释配制不同浓度，取各浓度药液1.50ml与50℃TSB琼脂培养基13.50ml混匀，倾注平板使其终浓度为12.8mg/ml，6.4mg/ml，3.2mg/ml，1.6mg/ml，0.8mg/ml，0.4mg/ml，0.2mg/ml，0.1mg/ml，0.05mg/ml。分别取2ul菌液在不同浓度的平板上点种。37℃厌氧培养48h。以肉眼所见平板上无细菌生长的最低浓度为GSPE的最低抑菌浓度。实验重复三次实验二：采用鲎试验测定GSPE对P.g产生LPS的影响在无热源管中，分别配制2mlGSPE溶液终浓度为0.8mg/ml，0.4mg/ml，0.2mg/ml，0.1mg/ml，0.05mg/ml，0.025mg/ml的TSB液体培养基，以及不含GSPE只有2mlTSB液体培养基的空白对照组，各组分别加入细菌混悬液（1×106cfu/ml）0.1ml，37℃厌氧培养72h。分别吸取7组不同实验样品0.2ml加入鲎试剂中，振荡后，置检测仪上检测。实验重复三次。实验三：GSPE对牙龈卟啉单胞菌生物膜的影响将配制好的菌液（1×106cfu/ml）分别加入96孔板中，每孔0.1ml。37℃恒温厌氧培养5天后96孔板内壁附着生物膜。将96孔板中菌液倾出。96孔板分四组，1-3列为实验组，自A-F行依次加入3.2mg/ml-0.1mg/ml梯度浓度的GSPE溶液。4-6为阳性对照组加入0.14%-0.0045%梯度浓度的次氯酸钠，7-9为阴性对照组，10-12为背景对照组，只加药液。培养24h后用PBS溶液轻柔清洗三次，结晶紫染色30分钟后倒出清洗，脱氧胆酸钠脱色30min后，置酶标仪测OD值。实验重复六次。结果:1、肉眼可见，GSPE溶液浓度为0.05mg/ml，0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.4mg/ml的TSB琼脂培养基上都长有少量细菌，而浓度为0.8mg/ml，1.6mg/ml，3.2mg/ml，6.4mg/ml，12.8mg/ml的TSB琼脂培养基上均无细菌生长，故可认为0.8mg/mlGSPE溶液为最低抑菌浓度。2、鲎实验结果显示，GSPE浓度为0.4mg/ml，0.2mg/ml，0.1mg/ml，0.05mg/ml，0.025mg/ml时反应结果呈阳性，浓度为0.8mg/ml时反应结果呈阴性。统计结果显示在0.05-0.4mg/ml范围内随着GSPE浓度的升高，对LPS抑制作用增强。3、经过GSPE药物及次氯酸钠作用后的吸光值比没有药物作用的明显减小，计算后的生物膜抑制率随药物浓度递增而增加。与次氯酸钠比较，GSPE对生物膜的清除作用不如次氯酸钠好。结论:1. GSPE对牙龈卟啉单胞菌有显著抑制作用，最低抑菌浓度为0.8mg/ml。2、随着GSPE浓度的升高，菌液中LPS含量越来越少，在0.05-0.4mg/ml浓度范围GSPE可以抑制牙龈卟啉单胞菌内毒素的产生和释放。3、GSPE对牙龈卟啉单胞菌的生物膜具有明显的抑制和破坏作用，且在0.1mg/ml-3.2mg/ml范围内随着浓度的升高，抑制作用越来越明显。