论文部分内容阅读
NOX-100是北京协和医药研究所和美国某医药公司共同开发的新一代心脑血管药物，为世界首创，因目前各项研究工作均在研发阶段，其相关内容目前国内外均无报道，目前所作的一系列研究工作只是根据美国方面提供的一小部分试验数据可供参考，所以对这一领域的探索和研究就变得十分重要，它将推动我国心脑血管领域药物的发展。本文主要对试制产品的纯度和有关物质等方面进行研究，为进一步制定原料药的质量标准及以后的相关制剂的质量标准，对于全面控制药品的质量，具有重要的现实意义。
目的：对NOX-100的有关物质进行研究，为以后制定原料药及相关制剂的质量标准奠定基础。
方法：1 NOX-100有关物质高效液相色谱方法的建立：
1.1选择合适的色谱柱。1.2考察不同的流动相系统，确定最佳的流动相系统。1.3根据NOX-100及NOK的紫外吸收图谱，确定检测波长。1.4确定有关物质检查的色谱条件。1.5专属性试验：将供试品经高温、高湿、氧化、酸、碱破坏性试验后，考察在拟定的色谱条件下的样品与其降解产物的分离情况。1.6有关物质分析方法考察：进行稳定性试验，确定最小检出量。
2 NOK检测方法的建立：根据NOK的结构特点，用示差折光检测器检测样品中NOK的含量，并用蒸发光散射检测器对试验进行比对性试验。
2.1示差折光检测器：
2.1.1确定NOK检测的色谱条件。
2.1.2专属性试验：将供试品经高温、高湿、氧化、酸、碱破坏性试验后，考察在拟定的色谱条件下的样品与其降解产物的分离情况。
2.1.3有关物质分析方法考察：进行稳定性试验，确定最小检出量。
2.1.4考察国内生产的NOX-100和国外生产的NOX-100的稳定性。
2.1.5考察三种不同的溶剂(流动相、甲醇、N-N-二甲基甲酰胺)不同溶剂溶解样品后的样品的稳定性。
2.2蒸发光散射检测器：
2.2.1确定色谱条件。
2.2.2专属性试验：将供试品经高温、高湿、氧化、酸、碱破坏性试验后，考察在拟定的色谱条件下的样品与其降解产物的分离情况。
2.2.3有关物质分析方法考察：确定最小检出量。
结果：
1 N0x-100有关物质高效液相色谱方法的建立：
1.1选择Di锄onsal C18色谱柱(200×4.6mm，5μm)。
1.2考察5种流动相系统，最终确定的流动相为：甲醇-0.01mol/L磷酸溶液(5:95)(用三乙胺调节pH值为7.1)。1.3 NOX-100在255nm和284nm的波长处有最大吸收，在228nm和270nm的波长处有最小吸收，NOK几乎无吸收。经考察，在255nm和284nm的波长处，杂质检出的灵敏度低，在末端区，杂质检出的灵敏度增大，为有效的检出杂质，因而选择215nm为检测波长。
1.4确定色谱条件：色谱柱为Di锄onsal C18色谱柱(200×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇一0.01mol/L磷酸溶液(5:95)(用三乙胺调节pH值为7.1)；检测波长为215nm。1.5专属性试验：NOX-100 NOX-100在光照和高温下比较稳定，没有明显的杂质生成。在酸、碱、氧化条件下，样品被不同程度的破坏，破坏所得到的杂质与主成分峰分离良好。1.6有关物质分析方法考察：用流动相配置的NOX-100溶液放置不稳定，在短时间内发生降解，1g c与t为线性关系，降解为一级反应。最小检出量为15ng。
2 NOK检测方法的建立：2.1示差折光检测器：2.1.1采用Diamonsil C18色谱柱(200mm×4.6mm，5 μm)；流动相：甲醇一O.01mol/L磷酸溶液(5：95)(用三乙胺调节pH为7.1)；流速1.Oml/min；采用示差折光检测器；进样量为20 μl。2.1.2NOX-100在光照和高温下比较稳定，没有明显的杂质生成。在酸、碱、氧化条件下，样品被不同程度的破坏，破坏所得到的杂质与主成分峰分离良好，在高温、强光、碱破坏、氧化条件下，NOK与其它杂质也能基本分离。2.1.3 NOX-100的检出限为400ng。2.1.4国外生产的NOX-100和国内生产的NOX-100具有基本相同的稳定性。NOK在该条件下24小时内稳定。2.1.5取NOX-100，分别用水、甲醇、N-N-二甲基甲酰胺制成适宜的溶液，结果表明在三种不同的溶剂条件下NOK的浓度均约为10％，与用流动相溶解样品的测定结果基本一致，从上述结果可以认为，样品中含有约10％的NOK。2.2蒸发光散射检测器：2.2.1采用Di锄0nsil C18色谱柱(200mm×4.6mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.01mol/L醋酸溶液(5：95)(用三乙胺调节pH为7.1)；采用蒸发光散射检测器，温度115℃，氮气流速为3.7L/min，撞击器关，灵敏度为4，进样量为20 μl。2.2.2 NOX-100在光照和高温下比较稳定，没有明显的杂质生成。在酸、碱、氧化条件下，样品被不同程度的破坏，破坏所得到的杂质与主成分峰分离良好，在高温、强光、碱破坏、氧化条件下，NOK与其它杂质也能基本分离。2.2.3 NOK的检出限为500ng。
结论：通过对NOX-100有关物质检测方法的研究，为优化生产工艺，为进一步制定原料药的质量标准及以后的相关制剂的质量标准，对于全面控制药品的质量，具有重要的现实意义。