辛伐他汀是目前应用最广泛的他汀类药物,具有调节脂代谢的功能,主要应用于心血管疾病。因其在水环境中广泛检出,该药物对水生生物,尤其是对鱼类的潜在影响值得关注。目前有关他汀类药物在鱼体内生物毒性和生物蓄积性研究比较有限。β-胡萝卜素-15,15’-加氧酶(β-carotene-15,15’-momoxygenase 1,bco1)是动物体内β-胡萝卜素转化成维生素A代谢过程中的关键酶,而维生素A对动物脂肪代谢具有重要调节作用。bco1与bco1l是编码此酶的主要基因。Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated 9(CRISPR/Cas9)技术是一种新型的以第三代人工核酸内切酶为核心工具的基因编辑技术,与其他靶向突变工具相比,CRISPR/Cas9具有效率高、成本低的优点。斑马鱼作为多个领域的模式动物,繁殖快,产卵量大,且由于其透明的非粘性卵在基因敲除技术应用中非常便利。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼的与β-胡萝卜素-15,15’-加氧酶编码相关的基因bco1与bco1l,构建bco1与bco1l基因缺陷型斑马鱼模型,以便深入开展斑马鱼bco1对维生素A合成以及脂肪代谢功能影响研究。并在此基础上探讨人用降脂药物--辛伐他汀对非靶生物--bco1与bco1l基因缺陷型斑马鱼维生素A及脂肪代谢干扰及胚胎发育影响。试验分别在斑马鱼bco1与bco1l基因的外显子选取sgRNA识别位点,通过体外转录制备sgRNA对斑马鱼I细胞期受精卵进行显微注射,检测sgRNA有效性并构建首建鱼,筛选可遗传突变体。通过喂食胡萝卜素及组织切片比较,对可遗传突变体进行基本的表型鉴定。本研究获得了具有bco1基因与bco1l基因可遗传突变体,确定bco1l基因突变具有纯合致死的作用,这为研究鱼类维生素A代谢、脂肪代谢以及相关发育过程等后续研究提供了实验模型参考材料。最后通过对斑马鱼野生型与bco1l基因突变体进行辛伐他汀暴露,确定在浓度为5.0?g/L辛伐他汀暴露72 h即可使野生型斑马鱼致畸,而bco1l基因突变体在浓度为10?g/L辛伐他汀暴露72 h方有显著致畸现象,显示出更强的耐受性,为探索bco1基因与bco1l基因与鱼类脂肪代谢的可能相关性提供依据。