室间隔缺损患者继发肺动脉高压后右心耳LncRNAs和mRNAs表达谱变化的研究

来源 :四川医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ufo0101
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目的:对照研究室间隔缺损患者继发肺动脉高压后右心耳LncRNAs和mRNAs的表达变化,为进一步研究与肺动脉高压相关的LncRNA提供数据基础。方法:将室间隔缺损患者按继发中重度肺动脉压和未继发肺动脉高压,分别纳入实验组和对照组各4例,在体外循环手术中切取少量右心耳组织,提取总RNA经质量检测合格后用于杂交合成cDNA,再经过芯片扫描仪扫描后进行数据转换并统计分析,得到 LncRNAs 和 mRNAs 数据。以 FoldChange>2,P<0.05 作为差异基因纳入标准,获得差异LncRNAs和mRNAs表达谱,并通过散点图(ScatterPlot)和火山图(VolcanoPlot)对差异表达 LncRNAs 和 mRNAs 直观标示,然后对数据进行聚类分析,并对差异表达的mRNAs进行GeneOntology、KEGG Pathways分析,获得相关生物学信息。结果:实验组和对照组基因表达谱比较:LncRNAs的表达水平有813个显著上调(其中有26个FoldChange>10倍,最高的为uc004aef.3,106倍),541个显著下调(其中有4个FoldChange>10倍,最高的为ENST00000580684,16倍);mRNAs的表达水平有527个显著上调(其中有 13 个 FoldChange>10 倍,最高的为 NM<sub>004887,24 倍),268 个显著下调(其中有7个FoldChange>10倍,最高的为NM<sub>005484,31倍),这些结果提示显著差异表达的LncRNAs可能参与了肺动脉高压调控,可能是通过广泛参与mRNAs表达的调控来实现的,但目前关于LncRNAs对肺动脉高压的调控机制研究太少,还缺乏肺动脉高压的LncRNAs基因库可查询,差异表达LncRNAs与mRNAs之间的具体关系尚不清楚。对显著差异表达的mRNAs进行GO分析,结果提示:在肺动脉高压患者右心耳组织中差异表达的mRNAs与炎症反应、免疫系统的过程及免疫反应、细胞外基质、肌细胞分化、肌原纤维组装、肌节、蛋白质结构域的特异性结合、内肽酶抑制剂激活、钙调蛋白依赖性蛋白激酶的激活、G蛋白偶联核苷酸受体激活、电压门控离子通道的激活、阳离子通道等人体内病理生理变化有显著关系,目前国内外已有大量研究文献显示这些病理生理变化广泛地存在于肺动脉高压的病变过程中。KEGGPathways分析显示,上调表达的mRNAs富集在14条通路中,富集程度最高的是“Peroxisome Proliferator-Activated Receptor signaling pathway(过氧化物酶体增殖物激活型受体信号通路)”和“Complement and coagulation cascades(补体和凝血级联反应)”通路;下调表达的mRNAs富集在15条通路中,富集程度最高的是“Antigen processing and presentation(抗原反应和表达)”通路和“Graft-versus-host disease(移植物抗宿主疾病)”通路。差异表达的mRNAs富集的29条通路都可能与肺动脉高压有关,其中有5条通路与目前文献报道的肺动脉高压调控通路一致,包括上调表达mRNAs富集度第一、二、四、十一位高的通路和下调表达mRNAs富集度第三位高的通路。有24条通路未见报道,尤其是下调表达mRNAs 富集度最高的“Antigen processing and presentation”通路和“Graft-versus-host disease”通路以及上调表达的mRNAs富集度第三的“Measles(麻疹)”通路,这些通路可能是本实验的新发现中很有价值的肺动脉高压机制研究方向。结论:右心耳组织术中易得,不违背医学伦理,室间隔缺损并发肺动脉高压时的LncRNAs变化显著,是室间隔缺损并发肺动脉高压机理研究较好的组织来源。利用LncRNA microarray基因芯片技术在室间隔缺损继发肺动脉高压的患者右心耳组织中筛选出26个特别显著上调(FoldChange>10倍)和4个特别显著下调(FoldChange>10倍)的LncRNAs,同时筛选出13个特别显著上调(FoldChange>10倍)和7个特别显著下调(FoldChange>10倍)的mRNAs,这些LncRNAs和mRNAs可以作为基因诊断肺动脉高压的新的生物标记蛋白,进行进一步研究。GO分析显示,与右心耳差异表达的mRNAs有显著关联的病理生理变化都与肺动脉高压调控相关。KEGG分析差异表达的mRNAs提示有29条与肺动脉高压相关的生物学通路,其中有5条与目前文献报道一致,其余24条是未见报道的通路,尤其是下调表达mRNAs富集的“Antigen processing and presentation”通路和“Graft-versus-host disease”通路以及上调表达的mRNAs富集的“Measles”通路,值得深入研究。
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