【摘 要】
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【目的】研究以脂质合成关键因子SREBP作为靶点增敏EGFR酪氨酸激酶抑制剂的可能性;明确脂肪酸合成代谢通路与EGFR通路之间是否存在协同作用,以及可能的机制;为临床EGFR靶向药物联合治疗方案提供实验证据及理论依据;【方法】1)采用小分子抑制剂和小干扰RNA作为SREBP靶向干预手段;实时定量PCR及Western blot用于检测基因敲除效率;采用CCK8法检测细胞活度;利用裸鼠皮下移植瘤进行
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划（2012CB932600）； 国家科技重大专项课题（2012ZX09506-001-005）； 国家自然科学基金资助项目（81471685,81471687,81572719,81530053）；
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【目的】研究以脂质合成关键因子SREBP作为靶点增敏EGFR酪氨酸激酶抑制剂的可能性;明确脂肪酸合成代谢通路与EGFR通路之间是否存在协同作用,以及可能的机制;为临床EGFR靶向药物联合治疗方案提供实验证据及理论依据;【方法】1)采用小分子抑制剂和小干扰RNA作为SREBP靶向干预手段;实时定量PCR及Western blot用于检测基因敲除效率;采用CCK8法检测细胞活度;利用裸鼠皮下移植瘤进行在体实验。2)采用免疫共沉淀及Pulldown技术证明MARVELD1与SREBP的结合;利用小干扰RNA对MARVELD1进行靶向干预。3)采用同位素示踪技术检测细胞利用[U-14C]葡萄糖从头合成脂质;利用荧光探针检测细胞膜流动性;选用油酸作为增加细胞膜流动性药物;利用Western blot检测EGFR激酶活性。【结果】1)靶向干预SREBP能够增加肺癌细胞对EGFR酪氨酸激酶抑制剂的敏感性;靶向EGFR能够增加SREBP小分子抑制剂的抗肿瘤效果;联合应用SREBP抑制剂白桦酯醇和EGFR靶向药吉非替尼能够有效抑制裸鼠皮下移植瘤的生长。2)MARVELD1与SREBP转录激活区域直接结合,并且正向调控SREBP功能活性;靶向干预MARVELD1能够通过SREBP增加肺癌细胞吉非替尼敏感性。3)干预脂质合成代谢能够降低细胞膜流动性;细胞膜流动性减低导致EGFR激酶活性下降;抑制脂质合成代谢能够降低EGFR激酶活性并增加吉非替尼敏感性,该作用被增加膜流动性的药物部分逆转。【结论】靶向脂质合成代谢能够增加肺癌吉非替尼敏感性,其部分机理是脂质合成代谢通过调节细胞膜流动性影响EGFR功能活性;靶向脂质合成代谢尤其是其关键因子SREBP有望成为联合EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗非小细胞肺癌的新方法。
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