无镁诱导神经元体外惊厥样放电后细胞微环境的变化

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目的无镁诱导体外培养神经元(neurons,N)放电,研究放电后N和星形胶质细胞(astrocytes,AST)共培养体系中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、谷氨酸(glutamate,GLU)、白介素-1beta(interleukin-1beta,IL-1β)动态变化及乳酸脱氢酶(lacticdehydrogenase,LDH)含量。方法以纯化的胎鼠海马N和新生鼠AST为研究对象,按照是否经过短暂的无镁标准细胞外液处理诱导反复的自发性惊厥样放电,分为N对照组、N无镁组、N+AST对照组和N+AST无镁组。 ELISA方法测定惊厥后不同时间点细胞培养上清液中的BDNF、NGF、IL-1β含量;高效液相色谱法测定不同条件下各时间点细胞上清液中GLU含量;细胞培养上清液中LDH的变化采用全自动生化分析仪测定。结果(1)N经无镁细胞外液处理,恢复正常培养72h后,仍旧存在反复的自发性“惊厥样放电”。(2)N+AST经无镁处理后48h,AST的体积增大,突起及细胞数目增多。(3)N+AST对照组在24h、48h细胞上清液BDNF较N对照组24h、48h细胞上清液BDNF升高(p﹤0.05)。N+AST经无镁处理后,在12h、24h、48h分泌的BDNF均较N+AST对照组相同时间点的BDNF升高,尤其12h、24h升高明显(p﹤0.01);而N经同样的无镁细胞外液处理后,各个时间点BDNF含量也有升高,但与N对照组比较,差异无统计学意义。N+AST经无镁处理后在24h分泌的BDNF较N无镁组24h分泌的BDNF升高(p﹤0.05)。(4)N+AST经无镁处理后,各个时间点NGF的分泌量与共培养对照组相同时间点相比均没有发现明显变化,而且各个时间点间NGF的含量也趋于平稳。(5)N+AST经无镁标准细胞外液处理后,细胞上清液中GLU的含量从6h开始就有增加,在48h、72h含量均较对照组同时间点GLU含量显著性增高,差异有统计学意义(p﹤0.05)。(6)N+AST经过无镁诱导反复自发的惊厥样放电后,细胞上清液中IL-1β的含量在12h、24h、48h较对照组相同时间点IL-1β的含量显著性增高,差异具有统计学意义(p﹤0.05,p﹤0.01)。(7)N+AST共培养体系经无镁标准细胞外液处理后,72h细胞上清液中乳酸脱氢酶显著高于N+AST对照组(p﹤0.01)。结论(1)N+AST在正常培养情况下分泌的BDNF由N和AST共同参与,N可能起主要分泌作用。短暂无镁处理的N+AST,经诱导放电后BDNF的分泌显著增多,并且可能主要来自惊厥微环境活化的AST。(2)无镁诱导N放电对共培养体系中NGF的分泌影响较小。(3)无镁诱导N放电后与AST共培养微环境中GLU和IL-1β的分泌均显著性增多,并且IL-1β的变化比GLU出现较早。(4)体外惊厥微环境对N具有损伤作用,导致LDH漏出增多。
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