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目的：急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）是常见的血液系统肿瘤，属我国十大高发恶性肿瘤之一。目前临床上常用糖皮质激素类药物（glucocorticoids,GCs），如地塞米松（dexamethasone,DEX）治疗急性淋巴细胞白血病，虽然ALL的临床缓解率高达80%，但是长期大剂量服用地塞米松会导致许多严重的不良反应，如骨质疏松、消化性溃疡等。因此如何使DEX对ALL发挥更好的疗效已成为当今ALL治疗学的重要研究课题。本课题采用氯喹（chloroquine,CQ）与地塞米松联合用药的方法以提高DEX对ALL的疗效，同时结合miR-155对细胞自噬的调节来初步探讨其作用机制，为临床治疗ALL提供新策略。
方法：1.采用CCK-8法检测DEX、CQ分别作用及协同作用不同时间（24h、48h、72h）后对ALL细胞株CEM/C1和BALL-1活性的影响；2.实时荧光定量核酸扩增检测系统（Real-time Quantitative PCR Detecting System，qPCR）检测CEM/C1、BALL-1与人骨髓瘤外周B淋巴细胞株U266-B1中miR-155的表达水平，由此比较ALL细胞与正常淋巴细胞间miR-155的表达差异；3.通过转染试剂lipo-2000将miR-155模拟物（miR-155mimic）及miR-155抑制物（miR-155inhibitor）转染至CEM/C1及BALL-1细胞中，48h后采用CCK-8法检测上调或下调miR-155对CEM/C1及BALL-1细胞活性的影响；4.CEM/C1及BALL-1细胞分别转染miR-155mimic和miR-155inhibitor，使上调或下调细胞内miR-155的表达，随后qPCR检测转录因子TFEB（transcription factor EB）、微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein1light chain3,LC3）、Beclin-1等细胞内自噬相关因子以及糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）的mRNA表达水平，以此探讨miR-155对自噬相关基因及GR基因的影响；5.Western blot检测转染miR-155mimic和miR-155inhibitor72h后的CEM/C1及BALL-1细胞中LC3-II/I、Beclin-1及GR蛋白的表达水平，从蛋白水平评价miR-155对自噬及GR的影响；6.不同浓度的DEX+CQ（50μM+10μM；100μM+20μM）处理CEM/C1及BALL-1细胞48h，采用qPCR检测细胞中miR-155和TFEB、LC3、Beclin-1、GR的mRNA的表达情况；7.DEX+CQ（50μM+10μM，100μM+20μM）作用CEM/C1及BALL-1细胞72h，通过Western blot检测细胞中LC3-II/I、Beclin-1及GR蛋白的表达情况。
结果：1.与单独使用DEX或CQ作用于CEM/C1及BALL-1细胞相比，DEX与CQ联合作用更能显著抑制CEM/C1及BALL-1细胞的活性；2.qPCR结果显示了与U266-B1细胞相比较，CEM/C1及BALL-1细胞中miR-155显著高表达；3.CCK-8实验结果显示，与未处理的CEM/C1及BALL-1细胞组相比，miR-155上调组细胞表现出高活性，miR-155下调组细胞则呈现出较低活性；4.上调CEM/C1及BALL-1细胞中miR-155后，细胞内TFEB、LC3、Beclin-1的mRNA表达升高，而miR-155下调则表现出相反的结果；但miR-155的上调或下调均对GR的mRNA表达无影响；5.Western blot结果显示，上调miR-155表达能够增加CEM/C1及BALL-1细胞内LC3-II/I、Beclin-1蛋白表达，减少GR蛋白的表达，而miR-155下调则使细胞内LC3-II/I、Beclin-1蛋白表达减少，GR蛋白表达增多；6.DEX+CQ能够显著下调CEM/C1及BALL-1细胞中miR-155和TFEB、LC3、Beclin-1的mRNA的表达，而对GR的mRNA表达无影响；7.DEX+CQ能够显著减少CEM/C1及BALL-1细胞中LC3-II/I和Beclin-1蛋白表达，增强GR蛋白表达。
结论：DEX与CQ联合使用能够显著抑制ALL细胞的活性，其可能的作用机制为下调ALL细胞内miR-155的表达，进而抑制细胞自噬，减少GR蛋白降解，从而促进DEX与GR的结合，最终启动下游一系列抗ALL信号通路。
方法：1.采用CCK-8法检测DEX、CQ分别作用及协同作用不同时间（24h、48h、72h）后对ALL细胞株CEM/C1和BALL-1活性的影响；2.实时荧光定量核酸扩增检测系统（Real-time Quantitative PCR Detecting System，qPCR）检测CEM/C1、BALL-1与人骨髓瘤外周B淋巴细胞株U266-B1中miR-155的表达水平，由此比较ALL细胞与正常淋巴细胞间miR-155的表达差异；3.通过转染试剂lipo-2000将miR-155模拟物（miR-155mimic）及miR-155抑制物（miR-155inhibitor）转染至CEM/C1及BALL-1细胞中，48h后采用CCK-8法检测上调或下调miR-155对CEM/C1及BALL-1细胞活性的影响；4.CEM/C1及BALL-1细胞分别转染miR-155mimic和miR-155inhibitor，使上调或下调细胞内miR-155的表达，随后qPCR检测转录因子TFEB（transcription factor EB）、微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein1light chain3,LC3）、Beclin-1等细胞内自噬相关因子以及糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）的mRNA表达水平，以此探讨miR-155对自噬相关基因及GR基因的影响；5.Western blot检测转染miR-155mimic和miR-155inhibitor72h后的CEM/C1及BALL-1细胞中LC3-II/I、Beclin-1及GR蛋白的表达水平，从蛋白水平评价miR-155对自噬及GR的影响；6.不同浓度的DEX+CQ（50μM+10μM；100μM+20μM）处理CEM/C1及BALL-1细胞48h，采用qPCR检测细胞中miR-155和TFEB、LC3、Beclin-1、GR的mRNA的表达情况；7.DEX+CQ（50μM+10μM，100μM+20μM）作用CEM/C1及BALL-1细胞72h，通过Western blot检测细胞中LC3-II/I、Beclin-1及GR蛋白的表达情况。
结果：1.与单独使用DEX或CQ作用于CEM/C1及BALL-1细胞相比，DEX与CQ联合作用更能显著抑制CEM/C1及BALL-1细胞的活性；2.qPCR结果显示了与U266-B1细胞相比较，CEM/C1及BALL-1细胞中miR-155显著高表达；3.CCK-8实验结果显示，与未处理的CEM/C1及BALL-1细胞组相比，miR-155上调组细胞表现出高活性，miR-155下调组细胞则呈现出较低活性；4.上调CEM/C1及BALL-1细胞中miR-155后，细胞内TFEB、LC3、Beclin-1的mRNA表达升高，而miR-155下调则表现出相反的结果；但miR-155的上调或下调均对GR的mRNA表达无影响；5.Western blot结果显示，上调miR-155表达能够增加CEM/C1及BALL-1细胞内LC3-II/I、Beclin-1蛋白表达，减少GR蛋白的表达，而miR-155下调则使细胞内LC3-II/I、Beclin-1蛋白表达减少，GR蛋白表达增多；6.DEX+CQ能够显著下调CEM/C1及BALL-1细胞中miR-155和TFEB、LC3、Beclin-1的mRNA的表达，而对GR的mRNA表达无影响；7.DEX+CQ能够显著减少CEM/C1及BALL-1细胞中LC3-II/I和Beclin-1蛋白表达，增强GR蛋白表达。
结论：DEX与CQ联合使用能够显著抑制ALL细胞的活性，其可能的作用机制为下调ALL细胞内miR-155的表达，进而抑制细胞自噬，减少GR蛋白降解，从而促进DEX与GR的结合，最终启动下游一系列抗ALL信号通路。