【摘 要】
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目的:寻找与肝移植(Liver transplantation,LT)术后急性细胞排斥反应(Acute cellular rejection,ACR)相关的血清蛋白标志物,并初探相应机制。方法:⑴收集天津市第一中心医院3
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目的:寻找与肝移植(Liver transplantation,LT)术后急性细胞排斥反应(Acute cellular rejection,ACR)相关的血清蛋白标志物,并初探相应机制。方法:⑴收集天津市第一中心医院3例经肝移植手术、病理证实的ACR患者血清,设为排斥组(ACR组);3例肝移植术后、肝功能各项指标达到临床正常值、预后良好患者血清,设为非排斥组(No-ACR组);6例健康体检者血清,等量混合后取出两份,设为健康对照组(Control组)。应用蛋白质组学和同位素标记相对与绝对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ)分离、筛选和鉴定出三组样本之间的差异性表达蛋白质,并应用KEGG和STRING软件对候选蛋白质进行生物学信息分析。⑵应用蛋白质印记法(Western blot,WB)和鲁米诺氧通道免疫(Luminescent oxygen channeling immunoassay,LOCI)分析技术,进一步验证候选蛋白质的差异性表达结果,同时建立定量测定血清差异表达蛋白质的新方法,并进行方法学评价。⑶利用酶联免疫吸附分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)在扩大样本的22例肝移植术后患者中做进一步的研究分析。结果:⑴经质谱定量分析,两组间差异倍数大于1.2的视为显著性差异表达蛋白质,在ACR组与Control组之间,共检出88个差异性表达的蛋白质;在No-ACR组与Control组之间检出39个差异性表达蛋白质;在ACR组与No-ACR组之间检出10个差异性表达蛋白质。⑵经KEGG和STRING软件分析得知ACR组与Control组、No-ACR组与Control组中,分别有46.67%和90%的差异性表达蛋白质集中在补体和凝血级联反应通路。⑶利用WB方法验证了补体因子H相关蛋白1(Complement factor H related protein 1,CFHR1)和补体因子H相关蛋白5(Complement factor H related protein 5,CFHR5)在ACR患者血清中的表达水平显著降低,并通过ELISA技术又发现了补体因子H(Complement factor H,CFH)也具有在ACR患者血清中表达量减少的特性,它们位于补体系统的信号通路之中,可作为进一步研究肝移植术后急性排斥相关机制的突破口,为诱导免疫耐受提供新的思路。结论:应用蛋白质组学、i TRAQ、WB和ELISA技术,鉴定出10种与ACR关系密切的差异表达蛋白,可作为开发ACR早期诊断标记物的候选蛋白;补体和凝血级联反应通路在肝移植术后被显著调节,预示与ACR的发生密切相关。
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