目的：顺铂是临床上常用的化疗药物，主要用于头颈部和泌尿生殖系统恶性肿瘤的治疗。内耳毒性是其主要毒副作用之一。但是，其导致内耳毒性的机制至今不详。随着研究的不断深入，发现顺铂引起的内耳毒性与一氧化氮有关。一氧化氮是一种重要的生物活性物质，在组织、细胞的正常生理功能中发挥重要作用。生理状态下机体内可以合成少量的一氧化氮，主要用于维持耳蜗的正常血流及神经传导。然而，在病理条件下，许多刺激因素可激活诱导型一氧化氮合酶，催化其底物，产生大量一氧化氮，而该酶是一氧化氮合成的限速酶。一氧化氮可以通过若干机制造成组织、细胞的损伤，进而影响细胞的代谢和功能。近来有研究表明：内耳的外毛细胞、内毛细胞及螺旋神经节细胞等处存在一氧化氮合酶。随着研究的进展，诱导性一氧化氮合酶与顺铂耳毒性的关系日益受到人们的关注。 为进一步研究一氧化氮在顺铂耳毒性机制中的作用，本课题采用听性脑千反应测定，光镜、电镜观察，免疫组织化学及图像分析技术等手段来研究丹参对顺铂中毒豚鼠耳蜗诱导性一氧化氮合酶表达的影响及对耳蜗毒性的防护作用，为临床肿瘤化疗并发症的防治提供辅助治疗措施。 材料与方法：以豚鼠为研究对象，将听力正常的白色红目豚鼠随机分三组：实验组、拮抗组和对照组。对照组（n=11）连续5天腹腔注射生理盐水2ml·kg^-1。实验组（n=10）连续 中文摘要5天腹腔注射)IM铂 Zing·kg”‘。桔抗组：（n叫）第一、H大腹腔注射丹参注射液sml七g－’，第三至第七大腹腔注射顺铂Zing·kg”’，同时第3、5、7天注射顺铂1小时后腹腔注射丹参注射液sml·kg－’。各组动物均于用药前及停药后测试听性脑干反应阈值及二波潜伏期。而后断头取耳蜗。标本根据不同技术要求，分三部分处理。一部分标本用4％多聚甲醛固定，脱钙10大后，石蜡包埋、切片，按时间顺序滴加一抗、生物素化H抗、SABC、DAB显色，用于免疫组织化学及光镜观察。而后，用显微图像分析系统进行图像分析，测定诱导性一氧化氮合酶阳性反应产物的平均灰度值。按此结果比较诱导性一氧化氮合酶表达的高低。一部分标本用2．5％戊二醛固定，去除骨壳、暴露耳蜗基底膜，饿酸处理，干燥、喷镀，用于扫描电镜观察。其余标本用4％戊二醛固定，脱钙12天，取耳蜗基底膜，饿酸处理，脱水、包埋。超薄切片，用于透射电镜观察。 结果：对照组豚鼠用药前后ABR阈值及1波潜伏期无变化。实验组动物应用顺铂后听阈显著上升，I波潜伏期明显延长。桔抗组动物ABR阈值及1波潜伏期虽然较正常组升高，但较实验组低。实验组、桔抗组自身前后对照比较有显著性意义（依次为P＜o．01，P叼刀5卜停药后桔抗组与实验组比较有显著性差别p功刀1入 光镜观察及免疫组织化学染色：对照组螺旋器及螺旋神经节细胞结构正常，细胞浆内未见棕黄色颗粒，呈iNOS阴性染色。实验组螺旋器中内外毛细胞明显变性，轮廓模糊，部分胞膜破裂，核裸露，胞浆内充满棕黄色颗粒，呈iNOS阳性染色。而且，螺旋神经节细胞浆内也充满棕黄 2 中文摘要 色颗粒。桔抗组耳蜗内外毛细胞、螺旋神经节细胞等处可 见少许棕黄色颗粒，染色较实验组浅，呈iNOS弱 阳性 染色。应用显微图像分析系统测定iNOS阳性产物的平均 灰度值，结果显示实验组灰度值较桔抗组小，经t检验， 二者有显著性差异。0＜0．01） 扫描电镜观察显示：对照组螺旋器内外毛细胞的纤毛 排列整齐。实验组绝大部分外毛细胞纤毛散乱、倒伏、甚 至缺失。桔抗组的内毛细胞呈簇状排列，整齐有序。螺旋 器的大多数外毛细胞排列整齐，少数外毛细胞表面可见纤 毛融合、散夫。 透射电镜观察：对照组耳蜗螺旋器诸细胞结构清楚， 超微结构未见异常。实验组外毛细胞内可见线粒体明显肿 胀，峭模糊或消失，严重者外膜破裂，局部膨出，空泡变 性。表面囊增多，表皮板变薄，胞浆内溶酶体增多。有髓 神经纤维髓鞘高度水肿，重者可出现内陷、卷曲或髓鞘溶 解。桔抗组外毛细胞中线粒体结构清楚，内毛细胞、支持 细胞未见明显异常。有髓神经纤维的髓鞘轻微水肿。 结论：从本实验可以看出，顺铂引起了明显的耳蜗毒 性改变，主要表现为ABR阈值升高，I波潜伏期延长。 通过对耳蜗螺旋器的超微结构观察，我们发现顺铂对耳蜗 螺旋器造成了较为严重的损伤。如外毛细胞的倒伏、缺失， 线粒体的肿胀、空泡变性、螺旋神经节细胞有髓神经纤维 髓鞘水肿、溶解等。免疫组织化学及图像分析显示：耳蜗 螺旋器的外毛细胞受损严重，iNOS染色呈阳性反应，且 灰度值较小。?