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hPepT2(Oligopeptidetransporter2,H+/peptidetransporter2)是POT转运蛋白家族的成员,主要存在于人的肾脏、肺部、大脑、乳腺末端上皮细胞中,其转运底物主要是二肽、三肽及一些类肽药物。hPepT2由729个氨基酸组成,含有12个跨膜结构域,在这些跨膜区上含有一些可能是寡肽转运蛋白转运所必须的保守的氨基酸序列,研究这些保守序列的性质,可以为研究寡肽转运蛋白的性质、结构与功能提供基础。通过分段法,利用PCR技术获得了PET30a(+)/PepT2(281-362),并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),构建得到了PET30a(+)/PepT2(281-362)/BL21(DE3)重组质粒。对重组质粒PET30a(+)/PepT2(281-362)/BL21(DE3)和PET30a(+)/PepT2(1-174)/BL21(DE3)进行了IPTG诱导表达,然后利用SDS-PAGE凝胶电泳法研究了IPTG诱导表达条件。结果表明,在37℃下,PET30a(+)/PepT2(1-174)/BL21(DE3)的IPTG最佳诱导条件为3h,IPTG的浓度为0.5mmol/L。用固相合成法合成了PepT2的保守肽段FYLSINAGS及其四种突变肽FYGLINSGG、FYGLINKGG、FYGLINAGG和FYLSINAGG,利用高效液相色谱进行了分离纯化,并对产物进行了质谱表征。利用紫外、荧光光谱法研究了这些九肽与二肽YY及DNA相互作用,考察了时间、肽浓度等对相互作用的影响。结果表明,反应时间对这些九肽与DNA相互作用的影响不明显;当九肽与YY及DNA相互作用后,除FYLSINAGG外,体系的紫外吸收光谱,均先呈现增色效应后呈现减色效应。通过荧光光谱检测,得到九肽对YY及DNA-EB体系的猝灭常数,表明它们的猝灭方式均为静态猝灭。通过比较紫外吸收光谱和荧光光谱,发现当C-末端的丝氨酸残基改变为甘氨酸残基后,肽的活性有所降低,说明它是保守序列上比较重要的氨基酸残基。