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p53基因是一种重要的肿瘤抑制基因,目前已克隆得到了多种鱼类的p53基因序列,但牙鲆体内的该基因未见报道。本文采用RACE技术克隆了牙鲆的cDNA全长,表明该基因cDNA全长1798bp,包括238bp的5’非编码区(UTR)、1095开放阅读框(ORF)、TGA终止密码子和432bp的3’非编码区(UTR)。该p53基因编码365个氨基酸,分子量约为40.9 Kda,等电点为6.5。序列分析表明:牙鲆p53蛋白和青鳉、川鲽的p53蛋白同源性较高,而与人、斑马鱼、鸡、爪蟾、虹鳟的p53蛋白同源性较低。p53基因在鱼类中分化程度较高,但本研究显示牙鲆p53蛋白在结构和序列上拥有p53蛋白的典型特征,如具有5个进化上高度保守的氨基酸簇、酸性疏水的N-末端,亲水带电的C-末端和倒数第二位上可以磷酸化的丝氨酸残基。本文采用RT-PCR法检测了p53基因的组织表达,研究表明:p53基因在健康牙鲆被检组织内均有表达,患淋巴囊肿病的牙鲆p53基因组织表达特征同健康牙鲆相似。本文利用PCR方法克隆了牙鲆p53基因DNA序列,结果显示:该基因全长5208bp,由11个外显子和10个内含子组成,第一个外显子不编码氨基酸序列, p53蛋白5个高度保守区域由第2、4、5、7和8外显子编码。本文克隆获得的牙鲆p53基因与人、鼠、斑马鱼和青鳉等的p53基因在结构上相同,表明p53基因的结构在进化上保守性较强。在获得牙鲆p53基因DNA序列的基础上,本文利用PCR-RFLP方法检测了牙鲆p53基因5-8外显子限制性酶切片段的多态性。结果表明:在第6外显子上存在1个BglⅡ限制性酶切多态位点,被BglⅡ酶切开的基因型定为A、未被切开的定义为a。发现该位点基因型在健康和患病牙鲆中基因型分布频率不同,即患病牙鲆的基因型是Aa,健康牙鲆的基因型是AA。因此,可以推测牙鲆p53基因第6外显子BglⅡ限制性酶切位点的多态性可能与牙鲆患淋巴囊肿病的发生有关。研究还发现在牙鲆p53基因5-8外显子上存在大量多态性位点;在第5和第6内含子上存在由部分序列插入和缺失产生的多态性;在牙鲆肿瘤细胞中未检测到p53基因cDNA的突变。