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目的:以PC12细胞为实验对象,观察低浓度毒死蜱对神经细胞的损伤作用,并探究依达拉奉抗毒死蜱诱导的PC12细胞损伤作用及其机制。方法:(1)MTT法检测不同浓度毒死蜱对PC12细胞活力的影响,并用以确定毒死蜱最佳损伤浓度以及依达拉奉最佳保护浓度;(2)设立空白组、DMSO溶剂对照组、毒死蜱损伤模型组、依达拉奉保护组,倒置显微镜下观察PC12细胞形态;(3)Hocehst33342细胞核荧光染色观察各组细胞凋亡情况;(4)氧化应激指标检测,包括ROS水平、MDA含量、SOD活性,用以评估毒死蜱及依达拉奉对PC12细胞内环境的影响;(5)Western blot分别检测各组全细胞和细胞核Nrf-2蛋白水平,研究依达拉奉抗毒死蜱损伤的机制;(6)筛选Nrf-2基因下调PC12细胞株,Western blot检验Nrf-2基因下调细胞株是否符合实验要求;(7)标记Nrf-2基因下调PC12细胞为KD,设立KD-DMSO组、KD毒死蜱组(KD-CPF)、KD依达拉奉组(KD-CPF+Ed),同等浓度条件下使用Nrf-2基因下调PC12细胞株重复(1)、(2)、(3)、(4)步骤,研究依达拉奉和毒死蜱对Nrf-2基因下调PC12细胞的作用。结果:(1)MTT法确定毒死蜱最佳损伤浓度为200μmol/L,依达拉奉最佳保护浓度为25μmol/L,毒死蜱对PC12细胞的损伤具有浓度依赖性,而依达拉奉可阻止毒死蜱对PC12细胞活力的下降;(2)光学显微镜下观察PC12细胞形态,DMSO溶剂组与空白组细胞无明显形态差异;毒死蜱组细胞形态完整性被破坏,突起缺损,细胞扁平,细胞密度低;依达拉奉组细胞形态完整,突起生长完好,细胞密度与毒死蜱损伤组相比明显密集,接近DMSO溶剂组;(3)Hoechst33342细胞核荧光染色显示毒死蜱组PC12细胞出现了一系列细胞凋亡的特征,细胞核荧光染色呈亮蓝色,细胞核固缩,核边界凹凸不圆滑;依达拉奉组与DMSO溶剂组无明显差异,细胞核荧光染色均呈暗蓝色,核边界完整清晰,形态统一,未显示任何细胞凋亡的特征;(4)氧化应激指标检测发现毒死蜱使PC12细胞内ROS和MDA水平上升,并抑制SOD活力,依达拉奉保护组ROS、MDA、SOD指标水平接近DMSO溶剂组,相比于毒死蜱组,ROS和MDA水平明显下降,SOD活力增强,依达拉奉表现出一定的抗氧化作用;(5)Western blot结果显示依达拉奉保护组全细胞和细胞核Nrf-2蛋白量明显多于其他两组,推测依达拉奉抗毒死蜱诱导的PC12细胞损伤作用与Nrf-2有一定联系;(6)Western blot结果显示Nrf-2基因下调PC12细胞中Nrf-2蛋白表达极显著低于正常PC12细胞,符合实验要求;(7)MTT结果显示毒死蜱降低了Nrf-2基因下调PC12细胞(KD)的细胞活力,且活力下降程度大于PC12细胞;然而依达拉奉的处理并没有显著提高KD细胞的细胞活力,与KD-DMSO组仍存在显著性差异,可见Nrf-2蛋白的缺失对依达拉奉发挥保护作用有一定的影响,致使其不能阻止毒死蜱损伤PC12的细胞活力;(8)光镜下观察发现KD-CPF组细胞与PC12毒死蜱组细胞状态相近,出现类似损伤,但KD-CPF组细胞形态损伤比正常PC12细胞损伤组更严重,细胞形态扁平无力,更多细胞突起缺损,毒死蜱诱导的KD细胞损伤程度更重。KD-CPF+Ed组细胞形态与KD-CPF组无明显改善,依达拉奉同样不能减轻Nrf-2基因下调PC12细胞的形态损伤;(9)Hoechst33342细胞核荧光染色显示KD-DMSO组细胞状态正常,细胞核形态统一,轮廓清晰,核染色呈暗蓝色;KD-CPF组细胞核染色呈亮蓝色,细胞核固缩,形态不一,细胞凋亡严重;KD-CPF+Ed组与KD-CPF组细胞凋亡程度相近,依达拉奉没有改善毒死蜱诱导的KD细胞凋亡;(10)KD-CPF组细胞内ROS和MDA含量显著升高,SOD活力下降,且变化幅度均大于正常PC12细胞,毒死蜱对KD细胞内环境损伤程度更大。给予依达拉奉处理并没有显著下降KD-CPF+Ed组细胞内的ROS和MDA水平,SOD活力也无明显提高,依达拉奉抗毒死蜱损伤KD细胞的作用减弱。结论:毒死蜱对PC12细胞具有损伤作用,可导致PC12细胞氧化应激,诱导细胞凋亡;依达拉奉具有抗毒死蜱诱导的PC12细胞损伤作用,其保护机制是通过上调Nrf-2蛋白表达,促进Nrf-2核转移实现的。