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神经坏死病毒(nervous necrosis virus,NNV)是病毒性神经坏死症(viral nervous necrosis,VNN)的主要传染病原,感染全球多种海水和淡水鱼类,在鱼苗期的致死率可达100%,严重制约着全世界的鱼类养殖业的健康发展。由于鱼苗特异性免疫系统发育不全,目前对于感染NNV的幼鱼尚无有效的病毒防治措施。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是引起鱼类细菌性败血症的主要致病菌。淡水鱼类细菌性败血症在我国是水产养殖过程中危害鱼类的种类最多、流行水域最广的一种急性传染病。由于抗生素的滥用导致大量耐药菌株的发生,研发新的防治手段刻不容缓。卵黄免疫球蛋白(Immunoglobulin of yolk,IgY)来源于卵生动物,经血清转移并富集至卵黄中,具有产量高、成本低和理化性质稳定的特点,广泛应用于被动免疫,尤其是免疫系统尚未发育完全的幼仔。本研究制备了两种特异性病原卵黄抗体。我们克隆并表达了赤点石斑神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)的重组衣壳蛋白,并将其作为抗原免疫产蛋母鸡制备特异性抗RGNNV的卵黄抗体。同时将灭活的嗜水气单胞菌免疫母鸡以制备抗嗜水气单胞菌卵黄抗体。开展了卵黄抗体的稳定性和免疫保护实验。主要结果如下:1.卵黄抗体的制备和效价。采用水稀释法分离鸡蛋中的卵黄抗体,两步硫酸铵盐析法进行纯化。ELISA检测显示首次免疫后第六周抗RGNNV卵黄抗体效价达到最高值。最高效价可达1:51200,而抗嗜水气单胞菌卵黄抗体于首次免疫后第七周效价达到最高值,效价为1:25600。两种卵黄抗体均可持续保持高效价数周。2.卵黄抗体的稳定性。抗RGNNV卵黄抗体在70℃以下、pH=2-10、及胃蛋白酶消化(pH=3-10)的条件下可以保持相对稳定的活性。抗嗜水气单胞菌卵黄抗体在60℃以下及pH值高于4时其活性稳定性较高。经30-60℃加热处理或pH(2-10)处理及胃蛋白酶消化(pH=3-10)的抗RGNNV卵黄抗体仍可以完全抑制RGNNV在GF-1细胞中增殖,但在pH=2的环境下胃蛋白酶消化处理的特异性卵黄抗体与病毒的中和能力有所减弱。证明卵黄抗体具有较稳定的耐高温、耐酸碱、耐胃蛋白酶消化的特点。3.抗RGNNV卵黄抗体的免疫保护作用。Western blot结果显示抗RGNNV卵黄抗体具有较强的特异性和亲和力,能够有效识别RGNNV衣壳蛋白。特异性抗RGNNV卵黄抗体能有效地中和RGNNV,抑制病毒在石斑鱼鳍条细胞(Grouper fin cell line,GF-1)中的复制,保护GF-1细胞免受病毒感染,表明特异性抗RGNNV卵黄抗体能有效防止RGNNV在细胞中的感染。4.抗嗜水气单胞菌卵黄抗体的免疫保护作用。在使用嗜水气单胞菌攻毒团头鲂前24 h注射特异性卵黄抗体,攻毒一周后存活率为60%;而注射非特异性卵黄抗体组和不注射卵黄抗体组的存活率仅10%。使用嗜水气单胞菌攻毒团头鲂后12 h注射特异性卵黄抗体,攻毒一周后存活率为50%,注射非特异性卵黄抗体和不注射卵黄抗体的实验组的死亡率为100%。这些免疫保护结果和组织病理切片结果一致。表明抗嗜水气单胞菌卵黄抗体有显著的预防和治疗嗜水气单胞菌感染的效果。