【摘 要】
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本文运用放射免疫法作为分离胰岛素的检测手段,具有快速、准确、灵敏度高、重复性好等优点,依此对分级提取直接锌盐沉淀法粗制胰岛素的各步骤进行优化。胰浆用85%乙醇提取半小时
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本文运用放射免疫法作为分离胰岛素的检测手段,具有快速、准确、灵敏度高、重复性好等优点,依此对分级提取直接锌盐沉淀法粗制胰岛素的各步骤进行优化。胰浆用85%乙醇提取半小时后,对胰渣用75%乙醇提取半小时,合并两次抽提液,调节pH至8.0除碱性蛋白,调节pH至2.5除酸性蛋白后,加入ZnCl2,除ZnSO4后,调节pH7.0,收集锌胰岛素沉淀,用醋酸溶解沉淀,加入23%(w/v)NaCl第一次盐析,收集盐析物,用醋酸溶解沉淀,加入16%(w/v)NaCl第二次盐析,所得盐析物即为胰岛素粗品。 采用柱层析法纯化胰岛素。选用QAE-Sephadex A—25阴离子交换柱,洗脱液I:0.06mol/L Tris,洗脱液Ⅱ:0.05mol/LHCl,流速:21ml/hr,样品用6ml洗脱液Ⅰ溶解,离心(10000rpm×15min),取上清1.2ml上样,分离得胰岛素色谱纯单峰。
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