川芎嗪治疗大鼠急性脊髓损伤差异表达蛋白质的蛋白质组学分析

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目的利用蛋白质组学技术和大鼠急性脊髓损伤(acute spinal cord injury, ASCI)模型,比较川芎嗪治疗与生理盐水治疗后脊髓蛋白质组表达谱的差异,鉴定川芎嗪作用相关的差异蛋白质。并对差异蛋白质进行初步功能分析,从蛋白质分子水平揭示川芎嗪治疗大鼠急性脊髓损伤的机制。方法正常成年SD大鼠12只,采用改良ALLEN氏重物打击法制作急性脊髓中度损伤模型12个。随机分成两组:(1)生理盐水治疗组(NS组,N组)(n=6);(2)川芎嗪治疗组(TMP组,T组)(n=6)。两组大鼠按术后动物存活的时间再各分为3天组和7天组两个亚组,每亚组3只大鼠。TMP组大鼠伤后30分钟开始予以川芎秦注射液经腹腔内注射200mg/kg,每天给药一次,3天组大鼠用药3天,7天组大鼠共用药5天。NS组大鼠给予等量的生理盐水经腹腔内注射,给药次数和实验组相同。造模后在相应的时间点处死大鼠并切取脊髓标本,每只大鼠取以损伤段为中心的长约6mm的脊髓组织。加入裂解液提取脊髓蛋白质后进行蛋白质样品浓度测定。以1000ug的上样量进行双向凝胶电泳,蛋白质凝胶采用考马斯亮蓝染色后用PDQuest-8.0.1图象分析软件进行凝胶图像分析,寻找并切取差异表达的蛋白质斑点。用胰酶进行胶内原位酶解,获得的小肽片段采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行质谱分析。获取肽质量指纹图谱后采用MascotWizard软件查询SWISS-PROT和NCBInr数据库进行检索,鉴定差异蛋白质。基于文献复习对检索鉴定的差异蛋白质进行初步功能分析。结果通过固相PH梯度双向凝胶电泳获得了分辨率较高的双向凝胶电泳图谱,图像分析后发现两组图谱间存在较明显差异,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱成功鉴定出了差异蛋白质。3天组共鉴定出了15个差异蛋白质,表达上调的有血清白蛋白前体、低分子量神经丝蛋白、波形蛋白、神经纤维酸性蛋白、α-1A微管蛋白、β-2A微管蛋白、β-2C微管蛋白、亮氨酸氨基肽酶、二氢嘧啶酶相关蛋白2,表达下调的有α-互联蛋白、60kDa热休克蛋白、71kDa热休克蛋白同源蛋白、70kDa热休克蛋白相关蛋白2、β-1热休克蛋白、磷脂结合蛋白1;7天组共鉴定出了19个差异蛋白质,表达上调的有血清白蛋白前体、α-1A微管蛋白、β-2A微管蛋白、低分子量神经丝蛋白、中分子量神经丝蛋白、乙醛脱氢酶、鸟嘌呤核苷酸结合蛋白β1亚基、β肌动蛋白、波形蛋白、神经纤维酸性蛋白,表达下调的有H2异性核蛋白、帕金森病蛋白7同系物、囊泡相关膜蛋白B、泛素结合酶E2N、丙酮酸脱氢酶E1β亚基、异柠檬酸脱氢酶α亚基、脑型肌酸激酶、α-互联蛋白、60kDa热休克蛋白。结合文献复习,差异蛋白质主要涉及到神经细胞的增殖、凋亡、应激反应等过程。结论急性脊髓损伤川芎嗪治疗组与生理盐水治疗组蛋白质组表达谱存在差异,差异蛋白质主要涉及到神经细胞的增殖、凋亡、应激反应等过程。为进一步阐明脊髓损伤修复机制及川芎嗪治疗大鼠急性脊髓损伤的机制提供了理论依据。
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