虎杖内生菌高效转化白藜芦醇苷的研究

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白藜芦醇是一种天然活性多酚化合物,具有抑制肿瘤、保护心血管、抗氧化、抗自由基等多种药理作用,被列为抗心血管病、抗癌最有前途的药物之一。虎杖中白藜芦醇往往以白藜芦醇苷形式存在,干燥虎杖根、茎中白藜芦醇含量仅为0.2%左右,而白藜芦醇苷含量可达2%。目前,直接从虎杖中提取白藜芦醇费时、费力、浪费资源,而有机合成白藜芦醇反应产率低,环境危害性大,为克服以上方法不足,本文采用微生物转化法转化虎杖,筛选并鉴定能有效转化其白藜芦醇苷为白藜芦醇的内生菌株J1,经诱变育种后得到优良突变菌株UJ1,优化菌株UJ1摇瓶发酵培养基及培养条件,并进行10L发酵罐验证。得到以下主要结果:1.从野生虎杖根、茎中初筛得到6株内生真菌,HPLC检测表明6株内生真菌均具有转化白藜芦醇苷能力,转化力最强菌株J1的转化率为25.6%,转化后发酵液中白藜芦醇含量达14.068μg/mL,为未发酵的2.65倍。2.结合形态学及分子生物学鉴定方法,鉴定内生菌J1为草酸青霉Penicillium oxalicum,GenBank登录号为HQ732137。3.以内生菌J1为出发菌株,进行紫外线和60Co Y射线诱变育种,得到优良突变菌株UJ1,其转化率较出发菌株提高8.4%,且遗传稳定。4.单因素及正交试验优化研究确定菌株UJ1发酵培养基最佳配方为:虎杖粉末1.5%,无水乙醇2%,CMC-Na2.5%,NH4N030.2%,Na2HP040.06%,CaCl20.1%:确定最佳培养条件为:温度28℃,初始pH5.5,接种量9%,装液量30mL/250mL,转速220r/min,时间60h。在以上优化条件下,白藜芦醇苷平均转化率达90.1%,相比未优化前提高56.1%。5.在摇瓶最佳培养基组合及最佳培养条件基础上,进行10L发酵罐验证试验,结果表明10L发酵罐中UJl菌株56h达到最高转化率82.5%。
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