Wnt信号调控骨髓源巨噬细胞参与肾脏纤维化的作用及机制

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目的:观察TGF-β1对骨髓来源巨噬细胞(bone marrow derived macrophages,BMDM)的影响,探讨Wnt信号调控该过程的作用与机制。方法:无菌分离获取小鼠BMDM,以集落刺激因子(M-CSF)作为刺激因素,于37℃、5%CO2培养箱中培养7d,倒置相差显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪鉴定BMDM纯度。后以转化生长因子(TGF-β1)作为干预因素,分别设立对照组(A组:α-MEM高糖完全培养基+M-CSF)、实验组(B组:α-MEM高糖完全培养基+M-CSF+TGF-β1),M-CSF浓度为60ng/ml,TGF-β1浓度为5ng/ml。以α-SMA作为肌成纤维细胞表面标志物,以F4/80作为巨噬细胞表面标志物,3天后流式检测α-SMA+F4/80+细胞、Western印迹法测定各组Wnt3a、DVL(Dishevelled)、β-catenin蛋白的表达。应用SPSS19.0统计软件进行数据处理。结果:1.M-CSF诱导骨髓来源细胞7天后BMDM比例最高,纯度达(94.44±6.11)%。且倒置显微镜下可见:细胞形态不规则,向四周伸出伪足并成树枝状、棒状或放射状边缘不清,贴壁生长。2.以M-CSF诱导7天为分组时间点,与对照组相比较,3天后实验组α-SMA+F4/80+细胞比例明显升高(t=6.365,P=0.0007)。3.以M-CSF诱导7天为分组时间点。与对照组相比较,3天后实验组Wnt3a、DVL、β-catenin的蛋白表达也显著增高(at=12.06,P<0.001;bt=8.168,P<0.001,ct=6.752,P<0.001)。结论:1.TGF-β1可刺激BMDM向肌成纤维细胞转化;2.Wnt信号通路可能通过经典信号通路参与调控BMDM的纤维化过程,通过降低巨噬细胞Wnt信号通路的活性可能成为延缓纤维化发生的潜在治疗思路。
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