慢性肾衰竭大鼠股骨皮质骨及松质骨Cbfa1表达与骨密度间的关系

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目的:慢性肾脏病矿物质和骨代谢紊乱(CKD-MBD)是慢性肾脏病(ChronicRenal Failure,CKD)患者重要并发症。肾性骨营养不良是CKD-MBD中骨的异常表现。肾性骨营养不良诊断的“金标准”为骨活检,但由于其临床操作复杂等问题,未被广泛应用。骨的评价存在较大困难。核心结合因子-a1(cbfa1)在成骨细胞发育、分化和骨形成过程中起着至关重要的作用,且其表达的改变可反映肾性骨营养不良的严重程度。本研究通过检测慢性肾衰竭大鼠模型股骨cbfa1的表达情况及相应部位的骨密度,探讨两者间的关系,为临床诊断CKD-MBD中肾性骨营养不良找到更好的评价指标。方法:本研究采用实验-对照研究方法。1实验对象:清洁级、健康、雄性SD大鼠;体质量为180~200g,共14只;于河北医科大学第四医院动物中心屏障环境适应性饲养1周后,随机分为正常对照组、慢性肾衰竭模型组2组。2实验方法:动物模型构建:应用硫酸腺嘌呤悬浊液灌胃法构建慢性肾衰竭大鼠模型,1-3周给予硫酸腺嘌呤悬浊液(硫酸腺嘌呤溶于1.5%甲基纤维素中制成100g/l的悬浊液)6ul/g每天灌胃给药,4-8周给予1.5%甲基纤维素6ul/g隔日灌胃。正常对照组给予甲基纤维素灌胃给药,给予1.5%甲基纤维素6ul/g在1-3周每天灌胃,在4-8周隔日灌胃给药。3标本留取及检测:8周后采用心脏取血法收集大鼠血标本检测其血肌酐、尿素氮、钙、磷等相关生化指标血清浓度。取左侧股骨,立即将股骨用生理盐水浸湿的纱布包裹,存入-80℃以下的冰箱中做骨密度试验。测量各组大鼠股骨的整体骨密度(Whole-Bone Mineral Density,W-BMD)、松质骨骨密度(Trabecular-Bone Mineral Density,T-BMD)、皮质骨骨密度(Cortical-Bone Mineral Density,C-BMD)。取右侧股骨。置入EDTANa2脱钙液脱钙,用于免疫组化染色及HE染色,检测大鼠股骨中Cbfa1蛋白的表达及松质骨和皮质骨的形态学改变。4统计学处理:应用SPSS13.0统计学软件进行统计学处理,符合正态分布的计量资料用均数±标准差(x s)表示,两组间均数比较用t检验,相关分析符合双变量正态分布作Pearson积差相关分析,余者采用秩和检验和Spearman相关分析。P<0.05认为差异有统计学意义。结果:1慢性肾衰竭大鼠模型的构建慢性肾衰竭组大鼠血肌酐、尿素氮明显高于正常对照组组大鼠血清水平(P<0.05);慢性肾衰竭模型组血清钙浓度(2.10±0.01mmol/L)低于正常对照组血清钙浓度(2.34±0.03mmol/L),慢性肾衰竭模型组血清磷浓度(2.21±0.03mmol/L)高于正常对照组血清磷浓度(1.75±0.07mmol/L),差异均有统计学意义(P<0.001)。慢性肾衰竭组大鼠肾脏HE染色亦符合慢性肾衰竭改变;慢性肾衰竭大鼠股骨HE染色:慢性肾衰竭模型组与正常对照组相比:小梁数增多,而脂肪空泡数减少,且皮质厚度变薄2慢性肾衰竭大鼠股骨骨皮质骨及松质骨Cbfa1表达的改变慢性肾衰竭模型组股骨松质骨Cbfa1表达(0.01539±0.00016meD)多于正常对照组股骨松质骨Cbfa1表达(0.01075±0.00026meD),慢性肾衰竭模型组股骨皮质骨Cbfa1表达(0.00367±0.00022meD)少于正常对照组股骨皮质骨Cbfa1表达(0.01143±0.00078meD)。差异均有统计学意义(P<0.001)。3慢性肾衰竭大鼠股骨皮质骨及松质骨骨密度的改变慢性肾衰竭模型组W-BMD(0.1405±0.0016g/cm2)低于正常对照组W-BMD(0.1571±0.0019g/cm2),慢性肾衰竭模型组C-BMD(0.1314±.0028g/cm2)低于正常对照组C-BMD(0.1550±.0057g/cm2),慢性肾衰竭模型组T-BMD(0.1662±0.0013g/cm2)高于正常对照组T-BMD(0.1583±0.0024g/cm2),差异均有统计学意义(P<0.001)。4慢性肾衰竭大鼠股骨骨皮质骨及松质骨Cbfa1表达与骨密度及生化指标的关系慢性肾衰竭大鼠股骨皮质骨骨密度与皮质骨Cbfa1蛋白表达做相关分析呈正相关(r=0.805,P<0.001),慢性肾衰竭大鼠股骨松质骨骨密度与松质骨Cbfa1蛋白表达做相关分析呈正相关(r=0.844,P<0.001)。慢性肾衰竭大鼠股骨整段骨密度与血清钙浓度做相关分析呈正相关(r=0.730,P<0.001),慢性肾衰竭大鼠股骨整段骨密度与血清磷浓度做相关分析呈负相关(r=-0.652,P<0.001)。结论:1慢性肾衰竭大鼠股骨发生骨重建,皮质骨骨密度降低,松质骨骨密度升高。2慢性肾衰竭大鼠股骨皮质骨Cbfa1表达减少,松质骨Cbfa1表达增多,可能与同部位骨密度改变相关。
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