【摘 要】
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本实验室从海洋真菌中筛选得到海洋青霉TS67。该菌株能产生抗植物真菌病害的次级代谢产物,对多种植物病源真菌具有不同程度的抗性,抗菌谱较广。尚未得到纯品,并且对其理化性
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本实验室从海洋真菌中筛选得到海洋青霉TS67。该菌株能产生抗植物真菌病害的次级代谢产物,对多种植物病源真菌具有不同程度的抗性,抗菌谱较广。尚未得到纯品,并且对其理化性质也所知甚少,所以本文在抗大豆尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)活性指导下,尝试探索利用吸附、结晶等分离手段对该物质进行富集和分离,以得到一定纯度的活性物质,确定出较为合理的分离纯化工艺路线和条件,并在分离之前,对海洋青霉TS67的发酵条件和培养基成分进行初步优化,以期获得较高产量的活性代谢产物。通过优化实验,得到改进后培养条件为:初始pH8.0,接种量8%,在180rpm下28℃振荡培养96h,优化培养基组成为:葡萄糖5g/L,甘油5g/L,蛋白胨3g/L,酵母膏1g/L,单位发酵液的活性提高了3.1倍;同时表明适量的甘油对活性物质的合成有利。通过分离纯化实验,筛选出适合吸附海洋青霉TS67所产活性物质的大孔吸附树脂X-5;确定最佳吸附pH值为5.0;不同浓度的甲醇溶液和乙醇溶液的洗脱实验表明,50%的乙醇溶液可以有效地将活性物质从X-5树脂柱上洗脱,而50%的甲醇溶液则可以有效地洗脱掉树脂上吸附的杂质和色素。吸附饱和后的X-5树脂柱,先用去离子水冲洗,然后用50%的甲醇洗去杂质和色素,再用50%的乙醇在4mL/min的流速下进行洗脱,合并活性高的洗脱液,浓缩后静置48h得到活性发酵产物的粗结晶。对其组成及结构尚需进一步研究。热稳定性实验表明,微酸性pH值和室温条件对维持活性产物的稳定有利,过高的温度或酸碱度都会显著降低活性,所以实验应尽量在温和的条件下进行。
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