目的:检测AML患者中BRIP1的突变情况,分析BRIP1突变在AML患者预后中的作用,研究BRIP1基因突变在AML中的分子作用机制。方法:1.利用PCR扩增及sanger测序法检测241例初治的AML患者骨髓细胞中BRIP1基因编码区突变情况。2.收集患者临床数据,采用Kaplan-Meier方法和Cox回归模型进行统计学分析。3.采用NCBI Blast在线分析软件对突变位点在不同物种中进行基因进化保守性分析。4.对BRIP1突变体蛋白结构模型进行预测。5.构建包含BRIP1野生型(wt)及突变体的真核表达载体,转染到HEK293T细胞中表达并通过免疫共沉淀技术对蛋白进行纯化,并进行体外活性分析。6.利用慢病毒侵染技术将BRIP1突变体转染到32D细胞中并用嘌呤霉素筛选稳定表达细胞系,Western Blot检测后进行细胞增殖、凋亡等实验。结果:1.在241例患者中,发现BRIP1基因的蛋白编码区有11个氨基酸位点存在突变,分别为 A144T、N196S、R419W、G481D、L537V、P787L、R814C、H870Y、I896V、Q944E、D1138N。2.突变组与未突变组患者的预后存在统计学差异3.通过同源比对发现,A144、R419、G481、L537、P787、H870、Q944 及 D1138 位点在不同物种中都高度保守。4.进行BRIP1蛋白结构模型预测发现G481、R814、H870、Q944等位点可能位于其重要功能结构区域。5.成功构建BRIP1野生型(wt)及突变体真核表达载体,通过免疫共沉淀及竞争洗脱方法纯化BRIP1野生型及突变体蛋白,利用Western Blot及PAGE胶银染的方法对纯化的BRIP1野生型及突变体蛋白进行检测。并利用荧光标记的DNA底物检测BRIP1的体外解旋酶活性。6.构建32D-BRIP1野生型及突变体稳定表达细胞株,发现不同突变体细胞株的增殖和凋亡存在差异。结论:通过对241例患者的骨髓细胞进行测序分析,发现BRIP1基因的蛋白编码区有11个氨基酸位点存在突变。收集相关临床数据进行统计学分析,发现突变组与未突变组预后存在差异。通过同源比对及蛋白结构分析,推测这些位点对BRIP1蛋白的功能具有重要影响。进行BRIP1体外蛋白活性实验,发现不同突变位点解旋酶活性存在差异。构建BRIP1野生型及突变体稳定表达细胞株,发现不同突变体细胞株的增殖、凋亡存在差异。