湖南柑橘溃疡病菌遗传多样性分析和室内抗药性测定

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本研究以湖南省地区柑橘溃疡病致病菌为研究对象,用16S rRNA和gyrB序列对收集的菌株进行PCR扩增、测序,分析来自湖南省不同地区和不同寄主植物的柑橘溃疡病菌之间的遗传分化距离。再根据各菌株的分化距离,选择差异较明显的多个菌株,测试其对两种主要杀菌剂的抗药性。最终得到的实验结果如下;1、从湖南省洪江、双峰、衡南、石门、零陵、永兴、平江、茶陵八个县(市)采集柑橘溃疡病样本,通过初步分离和特异性鉴定,获得了22个柑橘溃疡病菌菌株。2、通过扩增16S rRNA和gyrB的DNA片段,测序,运用非加权平均数聚类法对22个菌株进行遗传多样性分析。结果发现,对于16S rRNA片段,当遗传距离为0.0045时,22个试供菌株可以分为三个簇;对于gyrB片段,当遗传距离为0.0045时,除了同来自茶陵地区的两支菌株,其他菌株都可以单独成簇。研究表明:16S rRNA在柑橘溃疡病菌种内遗传多样性分析方面的分辨率较gyrB低。gyrB基因片段不仅能区分亲缘较近的外源菌株,还能对同一种属、不同来源的菌株进行进一步的细分。3、根据遗传距离的不同选取7个有代表性的菌株,用抑菌圈法和平板菌落计数法测试它们对噻菌酮和可杀得的敏感性。结果表明,两种杀菌剂对7个代表性菌株都具有一定的抑制作用,但彼此之间抑制程度相差不大。噻菌酮对7个菌株的EC50最大值为44.64μg/ml、最小值为34.20μg/ml,平均值约为37.36μg/ml,可杀得对7个菌株的ECso最大值为108.72μg/ml、最小值为77.92μg/ml,平均值约为91.55μg/m。7个菌株对这两种农药都没有产生明显的抗药性。
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