与凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)在大鼠急性胰腺炎中的作用机制

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:archer007
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:研究大鼠发生急性胰腺炎时,与凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)在胰腺组织的表达及其与caspase-1和IL-1β的关系;研究ASC在巨噬细胞系P388D1细胞中的表达情况,为评价ASC在大鼠急性胰腺炎时的作用机制提供实验依据。 方法:(1)将20只健康、成年的SD大鼠随机分成两组,一组用5%去氧胆酸钠逆行注入大鼠胰胆管进行急性胰腺炎造模,另一组作为正常对照组。造模24小时后处死大鼠,取大鼠新鲜血清,通过全自动生化分析仪检测大鼠血清淀粉酶活性;用ELISA法测定血清IL-1β含量。取大鼠胰腺组织经脱水、透明、浸蜡、包埋,做成蜡块后连续切片,用免疫组化LAB法检测ASC和caspase-1在胰腺组织中的表达,将染色的切片置于Olympus多功能显微镜观察并摄像,应用CA6300彩色图像分析系统进行定量灰度扫描,求出给定面积内的灰度值,比较急性胰腺炎组和正常对照组间ASC和caspase-1两项指标表达的差异。(2)制备感受态的DH5α大肠杆菌,将带有绿色和红色荧光的质粒pEGFP-ASC-C2和pDsRed2-ASC-C1分别转染大肠杆菌表达,培养细菌进行质粒的扩增,应用大连宝生物公司生产的试剂盒、采用SDS碱裂解法提取和纯化质粒。(3)复苏巨噬细胞系P388D1细胞,加入1640培养液约10ml混匀,分装至两个无菌培养瓶中,37℃,5%CO<,2>培养箱中培养48小时。从培养瓶中取出300μ1细胞液加到24孔培养板中汇片,置37℃,5%CO<,2>培养箱中培养24小时。在倒置显微镜下观察,当细胞覆盖至小孔底部一半时使用大连宝生物公司生产的转染试剂盒将纯化的pEGFP-ASC-C2和pDsRed2-ASC-Cl质粒分别转染至该细胞中继续培养24小时,最后涂片后进行荧光拍照,观察质粒在P388D1细胞中的表达情况。 结果:(1)急性胰腺炎组血清淀粉酶水平(77632±5934nknt/L)较正常对照组水平(16303±1450nkat/L)显著升高,两者间的差异在统计学上有意义(p<0.01);急性胰腺炎组IL-1β水平(386.26±50.54ng/L)较正常对照组水平(99.11±18.43ng/L)显著升高,两者间的差异在统计学上有意义(p<0.01)。(2)免疫组化检测、分析发现:ASC和caspase-1在正常对照组大鼠胰腺组织中少量表达,在急性胰腺炎组表达显著增加,两组间灰度值(24.86±523vs54.12±7.91和35.46±4.21vs65.32±8.10)的差异在统计学上均有意义(p<0.01)。(3)在巨噬细胞系P388D1细胞中ASC寡聚成斑点样。 结论:本实验证明了当发生胰腺炎时,单核-巨噬细胞系统激活,在胰腺组织的巨噬细胞中ASC的表达上调,发生寡聚并调节caspase-1的活化,导致IL-1β的分泌增加,引起炎症反应,从而证明ASC在胰腺炎的发病中起重要作用。
其他文献
本文分三部分论述了 介入引导下AsO纳米磁性粒子栓塞热疗兔VX2肝癌。   第一部分兔VX2肝癌模型制作的完善及综合影像学评价。  目的:进一步完善兔VX2肝癌模型的制作,比较
目的:  L5椎弓根钉植入时,由于缺乏像L1-L4的人字嵴结构,往往需扩大剥离软组织,以显露确认进钉点。虽然横突、上下关节突及其间隙可用于明确螺钉进钉点,但这些部位的剥离,增加医
目的:慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)是一种临床综合征,是各种心脏疾患的终末阶段。随着人口的老龄化趋势,CHF的发病率、病死率逐年上升。他汀类药物即三羟基三甲基戊
目的:由于疾病本身、麻醉手术影响、ICU的治疗环境、危重病人的治疗措施(如机械通气、血液透析、气管插管等)以及病人的心理因素等多种原因,均会进一步加重危重病人已经存在的
在知识经济时代,资讯的需求大大增加,给中国传媒带来巨大的机会,也带来了巨大的挑战;同时可以预见的大量的资本进入中国的媒体市场,购并、全球化、新旧媒体的交替……21世纪
对搜集于西藏昌都地区770份大麦地方品种进行鉴定和分类,它们属于1个种2个亚种253个变种,其中新变种63个。多棱大麦变种占95%,裸麦多于皮麦。变种中以稀穗、窄护颖、直对芒和短芒、齿芒、穗和
玉米间套复种面积占我国玉米总面积的2/3,占各类农作物间套复种面积的1/2。种植面积最大的是小麦玉米复种,以及玉米和豆类、薯类间套种。间套复种可以充分利用空间、时间和
按说,作为西安市委的一张机关报,顾名思义,也就是为市属各区县 服务的。然而,《西安日报》却独出心裁的又为该报开办了一个《区县经纬》版,为了将这个版办得更好,该报于今年 8月中旬
今年是我国胜利完成“九五”计划的一年,也是制订“十五”计划,迎接新世纪的一年。报道好“九五”成就对鼓舞全国各族人民实施第三步战略部署具有重要意义,是国家通讯社的重
本文通过对荣华二采区10