【摘 要】
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目的: 探讨补阳还五汤在MSCs向神经样细胞体内定向诱导分化过程中的作用,为MSCs在神经内科学领域的研究和应用奠定实验基础。 方法: 取成年健康SD大鼠股骨和胫骨骨髓,密
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目的:
探讨补阳还五汤在MSCs向神经样细胞体内定向诱导分化过程中的作用,为MSCs在神经内科学领域的研究和应用奠定实验基础。
方法:
取成年健康SD大鼠股骨和胫骨骨髓,密度梯度离心法分离获取骨髓单个核细胞(mononuclear cells,MNCs)。多次洗涤后,将细胞沉淀接种于含10%胎牛血清(FBS)的低糖DMEM(L-DMEM)培养液中,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的CO2培养箱中培养,细胞融合后用0.25%胰酶消化传代。
建立SD大鼠大脑中动脉阻塞(MCAo)模型,用线栓通过颈内动脉插入大脑中动脉起始端,2h后拔除线栓造成脑缺血-再灌注模型。将大鼠MSCs(rMSCs)通过尾静脉移植入移植组、联合组,假手术组、模型组通过尾静脉注入等体积生理盐水。联合组按剂量(15ml/kg)给药,假手术组、模型组、移植组分别以等量蒸馏水灌胃。各组大鼠于手术前3天开始给药,1次/天,于缺血2小时后再灌注7天进行取材。免疫组化染色了解大鼠缺血再灌注后缺血侧NSE、GFAP的表达,同时观察大鼠脑缺血再灌注的病理表现。
结果:
1.分离后的大鼠骨髓MSCs(rMSCs)在体外培养条件下,呈增殖性生长。传代后的rMSCs约3天左右可扩增一倍。
2.MSCs经诱导1 h后,即有部分细胞呈现神经元样形态,诱导5 h结束时,大部分细胞具有典型神经元样形态:较多的神经元样细胞聚集在一起,相邻细胞间的轴突联结成网状。
3.(1)假手术组在造模后7天,在脑组织中有少量NSE、GFAP分化;(2)模型组NSE、GFAP分化也较少,与假手术组相比,无显著性差异(P>0.05);(3)移植组NSE、GFAP的分化明显增多,移植组与假手术组、模型组相比有极显著性差异(P<0.01);(4)联合组较移植组相比,能使NSE、GFAP的分化明显增多,与假手术组、模型组相比有极显著性差异(P<0.01),与移植相比无显著性差异(P>0.05)。
结论:
1.MSCs可以在体外培养扩增;
2.MSCs在脑缺血大鼠脑内可分化为神经元样细胞和神经胶质细胞,修复缺失的神经组织;
3.补阳还五汤对MSCs分化为神经元样细胞具有促进作用。
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