sTNFRⅡ-gAD基因修饰间充质干细胞的实验研究

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lklqlk
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的  1:从人脐带组织分离和培养脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymalstem cells,UC-MSCs),探讨其分离方法、培养条件、细胞表型以及多向分化潜能等生物学特征。  2:构建sTNFRⅡ-gAD基因修饰的间充质干细胞,探讨其原有的免疫调节性能和新获得的抵抗高浓度TNFα的能力。  3:应用sTNFRⅡ-gAD基因修饰的间充质干细胞治疗小鼠胶原诱导型关节炎,探讨其在体内的发挥免疫调控作用的机制。  方法:  1:①建立分离培养方法:组织块贴壁法分离培养脐带间充质干细胞。②细胞生长及增殖曲线的测定③流式细胞术检测免疫表型④诱导分化培养检测其分化潜能。  2:通过脂质体转染的方法,将sTNFRⅡ-gAD质粒转入间充质干细胞,G418筛选获取稳定表达sTNFRⅡ-gAD融合蛋白的MSCs。不同浓度的IFNγ刺激,流式细胞术检测其表面分子ICAM-1和胞内IDO的表达,来研究其原有免疫调节性能。不同浓度的TNFα刺激,流式细胞术检测其表面分子ICAM-1表达,来研究其抵抗高浓度TNFα的能力。  3:牛Ⅱ型胶原+完全弗氏佐剂诱导小鼠关节炎。腹腔注射sTNFRⅡ-gAD基因修饰的间充质干细胞对其进行治疗。观察小鼠关节肿胀,测量记录足掌厚度,进行临床评分。测量小鼠血清炎症因子浓度。分离小鼠脾脏,流式细胞术检测Treg比例。  结果:  1:通过组织块贴壁法分离培养得到纤维养贴壁生长细胞,传代后,生长至90%汇合度呈现典型漩涡状;流式细胞术检测其免疫表型显示,表达间质细胞表面标志(CD29,CD44,CD73,CD90,CD105),表达MHC-Ⅰ类分子;不表达造血细胞标志,CD34,CD45,不表达MHC-Ⅱ类分子;诱导分化培养表明其具有成骨和成脂分化能力。  2:通过脂质体转染,G418筛选,成功得到稳定表达sTNFRⅡ-gAD融合蛋白的MSCs。基因修饰没有影响MSCs的免疫表型和IFNγ刺激对其免疫调节分子ICAM-1和IDO的上调作用。基因修饰使间充质干细胞获得了抵抗高浓度TNFα的新功能。  3:小鼠关节炎造模成功。腹腔注射sTNFRⅡ-gAD基因修饰的间充质干细胞治疗减轻了其严重程度。降低了其炎症因子水平。促进了其脾脏Treg的产生。  结论:  1:成功分离和培养脐带组织间充质干细胞  2:成功获得既保持原有免疫调节性能,又能抵抗高浓度TNFα的间充质干细胞  3:sTNFRⅡ-gAD基因修饰的间充质干细胞抑制了关节炎症和CIA的发展。
其他文献
建筑间距控制不仅需要满足工程技术、日照环境、视觉卫生、防灾救护、噪声控制等方面的要求,还应该通过建筑间距的管理,达到控制建筑形态、优化城市景观,减少建筑间互相遮挡,
子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)是最常见的妇科恶性肿瘤,其发病率呈逐年上升趋势。侵袭、转移是EC患者死亡的主要原因。因此,抑制侵袭转移是提高EC患者生存率的关键。迁移
【摘要】产业支撑是新型城镇化建设的根基。日照市积极贯彻以人为核心的城镇化理念,城镇公共服务供给、设施承载、环境吸引、城镇管理等能力加速提升,但始终未走出产业支撑能力不强的困境。实现城镇化高质量发展,应找准产业发展主攻方向,按照比较优势“扬长避短”,扬山海港资源丰富之长,补产业结构单一之短,不断夯实产业基础支撑。  【关键词】城镇化高质量发展;分析  长期以来,日照市经济发展速度和城镇化水平增长速度
随着我国社会建设等级的不断提升,当下各类产业发展和群众生产生活对于城市规划的要求相较于以往而言也有了明显的调整和改变,不再以单一的经济利润增长为本位,而是更加强调
国土空间规划是国家必要的战略布局,合理国土规划的实施要考量经济发展状况、社会发展程度、文化发展方向等多方面因素,结合自然资源的开发与利用及保护等,从而做出合理的国
随着国民经济的高速发展和人们生活水平的不断提高,人们对环境的舒适性提出了越来越高的要求.作为与人们工作和生活息息相关的建筑给排水工程,在使用过程中极易产生一定的噪
发端于三十年前的莱西经验体现了农村改革的创新求变、与时俱进.这对当前乡村振兴工作依然具有重大的现实意义.本文分析了新时代深化拓展莱西经验的历史意义和内涵,提出乡村
【摘要】每当一座酒店建筑伫立在我们视线中的时候,通常感受到的是来自建筑师心灵内部的感性以及每个空间带给我们的视觉感动;这就是方案创作的魅力。但是,不为人们所熟知的是,方案创作之后的施工图设计则是从另一种角度诠释建筑的完整性与工程的美学,它更为深入地渗透到建筑物内每一个细胞,延续着方案创作初衷进行着再创作。为了建筑的表现力,为了环境的舒适性,更为了酒店运营的经济合理性不断进行着再创作。  【关键词】
期刊
目的:通过调查分析,了解护理专业学生(以下简称护生)感知带教老师关怀行为、人文关怀能力与批判性思维的状况,探讨护生感知带教老师关怀行为、人文关怀能力与批判性思维三者间