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目的:通过检测结核性胸膜炎患者外周血中的单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cell,PBMC)、胸水中的细胞培养前后的树突状细胞(dendritic cells,DC)亚群和CD4+CD25+CD127+调节性T细胞数量;检测结核性胸膜炎患者外周血、胸水中单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、γ-干扰素诱导蛋白-10(interferon-gamma inducible protein-10,IP-10)的含量以及PBMC和胸水细胞上CCR2和CXCR3的表达,初步探讨它们在结核性胸膜炎发病中的作用及相互关系,有助于进一步阐明结核性胸膜炎的免疫发病机制,为结核病的生物免疫防治提供新线索。
方法:1.标本采集及实验分组:采集20例结核性胸膜炎患者及10例健康正常者的外周血,采集20例结核性胸膜炎患者的胸水。细胞因子刺激培养分组:采集的外周血和胸水标本均设IL-2和IFN-γ诱导培养组,其中结核性胸膜炎患者的胸水为8例,外周血PBMC 20例。
2.采用流式细胞术检测外周血PBMC及胸水细胞在培养前后的DC1、DC2亚群以及CD4+CD25+CD127调节性T细胞。
3.采用流式细胞术检测外周血PBMC及胸水细胞中的趋化因子受体CCR2及CXCR3。
4、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各样本血清及培养上清液中的IP-10及MCP-1的含量。
结果:1、患者外周血组的DC1/PBMC、DC2/PBMC明显低于健康正常外周血组(P<0.05);患者胸水中检测到DC细胞,与患者外周血问具有正相关(r=0.503及0.437,P<0.05);正常外周血IL-2诱导组中的DC1高于正常外周血IFN-γ诱导组的DC1(P<0.05);患者外周血IFN-γ,诱导组中的DC亚群均低于患者外周血中DC亚群,两者之间有显著性差异(P<0.05)。
2、患者PBMC中的Treg细胞值明显高于健康正常PBMC(p<0.05);患者胸水中检测到Treg细胞,与患者外周血间具有正相关(r=0.672,P<0.05);正常外周血IL-2诱导组的Treg均高于正常外周血对照组和正常外周血IFN-γ诱导组(p<0.05);患者外周血IL-2诱导组的Treg高于患者外周血IFN-γ诱导组(P<0.05);患者胸水IL-2诱导组的结果高于患者胸水IFN-γ诱导组(P<0.05);患者外周血IFN-γ诱导组中的Treg低于患者外周血组(P<0.05);患者胸水IFN-γ诱导组低于患者胸水组(P<0.05)。
3、患者外周血组血清中IP-10水平高于健康正常外周血组(P<0.01);患者胸水中有较高的IP-10水平,与患者外周血间具有正相关(r=0.572,P<0.05);患者外周血组的PBMC上CXCR3表达明显低于健康正常外周血组(P<0.01);患者胸水细胞上有CXCR3表达,与患者外周血间具有正相关(r=0.627,P<0.05);对外周血组和胸水组的IP-10与CXCR3呈正相关(r值为0.318,P<0.05);患者外周血组血清中MCP-1水平高于健康正常外周血组(P<0.01);患者胸水中有较高的MCP-1水平,与患者外周血间具有正相关(r=0.455,P<0.05);患者组外周血组PBMC上CCR2表达明显高于健康正常外周血组(P<0.05);患者胸水细胞中有CCR2表达,与患者外周血间具有正相关(r=0.396,P<0.05);患者外周血组和胸水组的MCP-1与CCR2有正相关(r值为0.227,P<0.05)。患者外周血中PBMC同时表达CCR2和CXCR3明显低于健康正常外周血组,有显著性差异(P<0.05)
4、患者外周血及胸水中Treg与DC呈正相关(r=0.450,P<0.05);患者外周血及胸水中Treg与CXCR3、CCR2均呈正相关(r和P值分别为0.760、0.472,P<0.05);外周血中DC与CXCR3、CCR2均呈正相关(r值分别为0.289和0.448,P<0.05)。
结论:1、结核性胸膜炎患者外周血DC值明显降低,胸水中能检测到DC,体外培养外周血及胸水中DC值受IL-2和IFN-γ刺激影响。
2、结核性胸膜炎患者外周血Treg细胞值明显升高,胸水中能检测到Treg细胞:体外培养外周血及胸水中Treg细胞受IL-2和IFN-γ刺激影响,其中IL-2诱导,IFN-γ抑制。
3、结核性胸膜炎患者外周血IP-10、MCP-1及CCR2表达明显升高,但CXCR3表达明显降低;胸水中有IP-10、MCP-1及CXCR3、CCR2的表达。
4、结核性胸膜炎患者外周血、胸水中Tr、DC与趋化因子及受体均呈正相关,应该是参与结核性胸膜炎发生发展的重要免疫细胞和免疫分子。