人溶菌酶基因在酿酒酵母细胞中的表达研究

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溶菌酶(Lysozyme,EC3.2.1.17),又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶,是英国细菌学家A.Fleming于1922年在鼻粘液中发现的强力杀菌物质.Sylvia等人研究表明,人溶菌酶、核糖核酸酶和人绒毛膜促性腺激素协同作用,具有抗HIV病毒的功能.我们采用基因合成的手段得到了人溶菌酶基因.在基因设计过程中,我们使用了最适于酿酒酵母的且被认为适于合成基因表达的密码子.整个基因全长为411bp,它包括了编码人溶菌酶的结构基因,起始密码子ATG,终止密码子TAA、TGA,以及两端的HindⅢ和EcoRI的识别顺序.分成的24个寡核苷酸片段由大连TAKARA公司合成.我们用T<,4>DNA连接酶将合成的基因片段连接成完整的人溶菌酶基因.然后将其克隆到穿梭质粒pYES2/CT中,再转化到酿酒酵母细胞INVSc1中.经过诱导,目的基因在S.cerevisiae中以不溶的、非活性形式获得了表达.经复性和纯化,我们得到了具有生物活性的人溶菌酶.
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