【摘 要】
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蟋蟀保幼激素抑制素(allatostatin AST)是蟋蟀脑中分泌的一种多肽类激素物质.体外实验显示它可抑制昆虫咽侧体合成保幼激素.蟋蟀AST基因串联体共编码15个AST多肽,每个多肽抑
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蟋蟀保幼激素抑制素(allatostatin AST)是蟋蟀脑中分泌的一种多肽类激素物质.体外实验显示它可抑制昆虫咽侧体合成保幼激素.蟋蟀AST基因串联体共编码15个AST多肽,每个多肽抑制咽侧体合成保幼激素的能力不同.分子生物学研究表明,它们拥有共同的C末端序列Y/FXFGL/I/V.Grb-AST<,6>编码8个氨基酸残基,其一级结构为N-SRPFGFGL.Grb-AST<,6>编码15个AST多肽中的第6个多肽.该文采用改进的"自身模版-引物"法构建Grb-AST<,6>串联体,先设计出一对特异引物,用T4 DNA polymerase构建成模板,再通过Pyrobest DNA polymerase进行PCR扩增,从中得到一个含有16个拷贝的Grb-AST<,6>的串联体.将构建后的基因串联体分别在大肠杆菌pET表达系统中的pET21,pET22,pET30,pET44a表达载体和pQE表达系统中的pQE30表达载体中进行了表达.从各个表达结果中筛选出表达量高的pQE30/SG13009[pREP4]表达组合.这个组合进行表达的最优条件为菌液浓度OD<,600>=0.8和诱导剂浓度1.0mM.表达蛋白质的分子量为22.9114KD.用表达产物饲喂甜菜夜蛾,进行虫效实验,实验结果表明Grb-AST<,6>表达蛋白具有较明显的抑制幼虫生长和杀虫的能力.饲喂Grb-AST<,6>表达蛋白6天后,处理组死亡率明显高于对照组.第8天死亡率达到高峰,为30.58﹪,对照组为2.26﹪.
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