MicroRNAs与内侧颞叶癫痫发生发展机制的相关性研究

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第一部分:白细胞介素-1β和microRNA-146a在幼鼠模型和儿童内侧颞叶癫痫中的表达目的:越来越多的证据表明神经炎症反应在内侧颞叶癫痫(Mesial temporal lobe epilepsy, MTLE)的发病机制有着重要的作用。本研究的目的是探讨前炎性细胞因子白细胞介素-1β(Interleukin-1β, IL-1β)和转录后的炎症相关的microRNA146a (miR-146a)在幼鼠MTLE模型和儿童MTLE患者中的动态表达情况。方法:运用逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹和实时荧光定量PCR等方法来研究11日龄大鼠海马中IL-1β和miR-146a的表达。分别检测MTLE急性期、潜伏期和慢性自发发作期(分别为氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫持续状态后的2h、3w和8w)IL-1β及miR-146a的表达情况,对照组海马组织取相同的时间点检测。用同样的方法检测儿童MTLE海马和正常对照组海马IL-1β和miR-146表达变化。结果:IL-1β和miR-146a在儿童和幼大鼠MTLE的不同时期表达不同。IL-1β和miR146a表达均明显增加,但呈负相关:IL-1β在MTLE急性期海马组织中表达最高,而此时miR-146a的表达最低;在miR-146a表达最高的潜伏期,IL-1β表达则最低。在慢性自发发作期两者的表达均增加,但增加的幅度低于急性期和潜伏期。结论:我们首次研究了在氯化锂-匹罗卡品诱导的幼鼠MTLE模型和儿童MTLE患者中miR-146a的表达情况。证实IL-1β和miR-146a在儿童和幼大鼠MTLE模型中表达均增加。阐明了炎症反应在儿童和幼大鼠MTLE发病机制中的作用。第二部分:miR-124, miR-134, miR-132和mi R-21在幼鼠模型和儿童内侧颞叶癫痫中的表达目的:内侧颞叶癫痫(Mesial temporal lobe epilepsy, MTLE)的发病率高、药物治疗效果不好,严重危害人类健康。MicroRNAs是一类调节蛋白编码基因转录后表达的非编码RNA,它们可能在MTLE的发病机制中起重要作用。本研究的目的在于观察在幼鼠MTLE模型三个时期和儿童MTLE患者中,脑组织特异性表达的miR-124和miR-134以及炎症反应相关的miR-132和miR-21的动态表达改变。方法:采用实时荧光定量PCR方法检测25日龄幼鼠海马中脑组织特异性表达的miR-124和miR-134以及炎症相关的miR-132和miR-21的动态表达改变。分别检测MTLE大鼠模型急性期、潜伏期和慢性自发发作期(分别为氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫持续状态后的2h、3w和8w)的表达情况,对照组海马组织取相同的时间点检测。用同样的方法检测儿童MTLE患者和正常对照组海马miR-124、miR-134、 miR-132和miR-21表达改变。结果:在大鼠MTLE模型的三个时期miR-124和miR-134的表达改变几乎相同。在急性期和慢性自发发作期miR-132和miR-21表达均明显上调,在潜伏期miR-132表达上调,而miR21表达下降。四种miRs在儿童MTLE的海马组织中表达均上调。结论:miR-124和miR-134在大鼠MTLE模型抽搐相关的两个时期及儿童癫痫患者海马中表达显著增加,表明miR-132和miR-21可能与MTLE发病相关。第三部分:脑组织富含的miR-9及miR-138在幼鼠内侧癫痫模型及儿童内侧颞叶癫痫中的动态表达改变目标:近来microRNAs在MTLE发病中的新作用引起了人们极大的关注。本研究旨在观察脑组织中富含的miR-9和miR-138在幼鼠MTLE模型三个时期及儿童MTLE患者中的动态表达改变。方法:采用实时荧光定量PCR法检测25日龄幼鼠脑组织中miR-9和miR-138的表达情况。分别检测急性期、潜伏期和慢性发作期(分别为氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫持续状态后的2h、3w和8w)miR-9、miR-138的表达改变,对照组取相同的时间点进行检测。用同样的方法检测儿童MTLE患者和正常对照组海马miR-9、miR-138表达改变。结果:在大鼠MTLE模型急性期及慢性自发发作期miR-9表达较对照组明显升高,而在潜伏期表达与对照组无明显差异。miR-138在大鼠MTLE模型的三个时期中表达均降低。结论:我们首次证实了大鼠脑组织中富含的miR-9和miR-138在幼鼠模型和儿童MTLE患者的不同表达变化。对这些miRs的调控可能成为抗癫痫药物治疗的新靶点。
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