内蒙奶牛乳房炎致病金葡菌耐药调查及对环丙沙星耐药机制初探

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本文对内蒙古地区奶牛乳房炎发生情况及分离的金黄色葡萄球菌的耐药情况进行调查。用奶牛乳房炎诊断液来鉴别隐性和临床型乳房炎;采用肉汤微量稀释法,对从本地区12个奶牛场随机抽取的611份奶样中分离出的154株金黄色葡萄球菌对25种药物进行体外药敏试验;采用纸片法对苯唑西林耐药的菌株做耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)测定;采用碘量法分析菌株产β-内酰胺酶的情况。其中隐性乳房炎的发病率为55.75%,乳区发病率为31.70%,金黄色葡萄球菌的阳性率为25.72%;临床型乳房炎的发病率为16.07%,乳区发病率为6.28%,金黄色葡萄球菌的阳性率为22.22%。154株金黄色葡萄球菌对25种抗菌药物总耐药率较高,其中对氨苄西林、甲氧苄啶、青霉素G、磺胺嘧啶和红霉素的耐药情况最严重,耐药率分别为100%、100%、99.35%、98.70%和95.45%。分离菌株最少耐受3种药物,最多耐受20种药物,且最主要集中于5、6、7和9重耐药。154株金黄色葡萄球菌中,仅检出3株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,146株产β-内酰胺酶,产酶率为94.81%。可见,内蒙古地区的奶牛乳房炎致病性金黄色葡萄球菌的耐药隋况比较严重。 采用肉汤微量稀释法,检测了154株金黄色葡萄球菌对11种氟喹诺酮类药物的耐药情况。结果,分离菌株对11种药物的耐药率在17.50到36.40%之间,而且耐药菌株地域分布集中。然后,挑选出包括环丙沙星耐药菌株(27株)、敏感菌株(3株)和质控菌株(1株)共31株菌,用来研究金黄色葡萄球菌对亲水性氟喹诺酮类药物环丙沙星的耐药机制。通过扩增31株菌的gyrA、gyrB、grlA、grlB基因的喹诺酮类药物耐药决定区(QRDR),试验发现GrlA中Ser80和GyrA中Ser84&Glu88的氨基酸变化普遍存在于各个耐药水平的菌株中,而且GyrA中Glu88的变化引起高水平耐药。本试验没有发现对耐药机制有贡献的GyrB和GrlB的普遍氨基酸变化,但是gyrB基因中一个不引起氨基酸变化的点突变广泛的存在于大多数的耐药菌株中。本试验建立了检测金黄色葡萄球菌中环丙沙星浓度的高效液相色谱法(HPLC-FLD),以期研究人医临床密切关注的Nora外排泵对兽医临床分离的金黄色葡萄球菌耐环丙沙星机制的贡献。通过比较有无NorA外排泵抑制剂-氰氯苯腙(CCCP)存在时环丙沙星蓄积量的差异,发现3l株菌中有11株菌的药物蓄积量的变化有明显差异(P<0.05),说明ll株菌中存在NorA外排泵。进一步通过分析金黄色葡萄球菌对环丙沙星体外药敏试验结果(MICs)分别与环丙沙星在金黄色葡萄球菌中的稳态蓄积量(SCCs)、环丙沙星在菌内蓄积量的变化倍数以及P的相关性(用r表示),发现NorA外排泵存在于各个水平的耐药菌株中并可能对各个水平耐药机制做出贡献。 综上所述,本研究调查了内蒙古地区奶牛乳房炎致病性金黄色葡萄球菌的耐药情况和来自动物源的金黄色葡萄球菌对氟喹诺酮类药物耐药机制的特点,预示了对人医临床氟喹诺酮类药物疗效的威胁,也为金黄色葡萄球菌对氟喹诺酮类药物耐药机制的进一步研究提供了兽医临床的依据。
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