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肝干细胞在理论研究和临床应用都有重要意义。一方面,肝干细胞可能参与肝脏严重损伤后的再生与修复,因此,肝干细胞的增殖与分化及其机理的研究,有助于阐明肝脏的发育机制。另一方面,肝干细胞具有强大的增殖能力,并能分化为肝细胞,这将为肝病的细胞移植、组织工程和基因治疗带来新的希望。肝组织是否存在肝干细胞的问题一直在争论,由于肝干细胞缺乏特异性表面标记物,给肝干细胞的分离和鉴定带来很大困难。成年肝组织的肝干细胞数量很少,且处于休眠期,要获取足量且存活率高的肝干细胞,必须建立良好的激活模型。 目的 建立大鼠肝卵圆细胞增殖模型,进一步进行肝干细胞的分离、纯化和鉴定。 方法 选择81只体重200±20g的雄性Wistar大鼠,随机分为对照组和模型组。采用2-AAF+2/3肝切除方法(2-acetylaminofluorene+two thirds partial hepatectomy,2-AAF+2/3PH)建立肝卵圆细胞增殖模型。使用不同剂量的2—AAF通过胃管灌喂,5天后行肝2/3切除,术后第二天各组按各自剂量继续灌喂,并于术后第4h、4d、8d、12d、16d不同的时间点取肝组织,光镜及电镜下观察肝干细胞增殖情况,并行免疫组织化学染色。利用胶原酶原位灌注及Percoll密度梯度离心分离大鼠肝卵圆细胞,并把分离细胞置于37℃5% CO2孵箱中培养,细胞在倒置显微镜、电镜下观察细胞特点,免疫组织化学染色鉴定肝卵