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肝衰竭是由多种因素引起的严重肝脏损害，患者容易引起败血症休克和多脏器功能衰竭，其作用机制复杂，其中各种炎性细胞因子在肝衰竭的发生发展中起到重要作用。目前对于炎性细胞因子如何导致肝衰竭的机制并不十分清楚。Toll样受体(Toll-likereceptors，TLRs)作为新近免疫研究的热点，在肝衰竭过程中的作用日益受到重视。
TLRs是一种重要的模式识别受体，主要表达于免疫细胞尤其是单核巨噬细胞和树突状细胞表面，与相应配体结合后可以激活免疫细胞并促进免疫细胞分泌大量的炎性细胞因子和趋化因子，发挥机体的抗感染能力，构成机体免疫反应的第一道防线。最新研究表明，TLRs广泛参与肝脏针对细菌和病毒防御的免疫反应，并在众多的肝脏疾病如肝硬化、肝再生、肝脏缺血再灌注损伤、酒精性肝病、非酒精性脂肪肝、乙型肝炎和丙型肝炎病毒感染、原发性胆汁性肝硬化中发挥作用。但是，有关TLRs在肝衰竭中的作用机制并不清楚。研究与炎性细胞因子密切相关的Toll样受体2、4在肝衰竭中的作用和表达，将有助于了解肝衰竭的发病机制。
一、目的
研究肝衰竭患者外周血单核细胞Toll样受体2、4基因的表达及其与细胞因子的关系，探讨Toll样受体2、4在肝衰竭中的作用。
二、方法
32例肝衰竭患者来自2007年6月1日至2007年12月30日浙江省台州医院感染科住院患者，均为乙型肝炎病毒感染。所有病例均排除近期感染以及合并其它慢性疾病者。32例均为慢加急性肝衰竭患者，其中，肝衰竭早期患者18例，中晚期患者14例。另选20例健康献血者为正常对照组，20例慢性乙肝患者为慢性乙肝组。采用Ficoll淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，Trizol试剂抽提总RNA，反转录后进行PCR扩增，所得的产物经凝胶成像分析，获取TLR2、4mRNA光密度值。采用酶联免疫吸附试剂检测外周血内毒素、TNF-α、IL-6水平，分析它们的变化及相互关系。采用SPSS13.0统计学软件包分析和处理实验结果数据。
三、结果
正常对照组、慢性乙肝组、肝衰竭早期组和中晚期组血浆内毒素水平分别为0.05±0.01、0.11±0.04、0.21±0.08、0.30±0.11EU/ml，呈逐渐递增趋势，各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。正常对照组、慢性乙肝组、肝衰竭早期组和中晚期组血清TNF-α水平分别为38.56±7.68、51.92±12.37、102.48±18.25、148.52±26.38pg/ml，TNF-α水平逐渐上升，各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。正常对照组、慢性乙肝组、肝衰竭早期组和中晚期组血清IL-6水平分别为7.09±1.15、13.24±3.75、19.58±5.36、24.62±9.27pg/ml，IL-6水平逐渐上升，各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。正常对照组、慢性乙肝组、肝衰竭早期组和中晚期组外周血单核细胞TLR2mRNA水平分别为0.502±0.089、0.644±0.105、0.745±0.126、0.905±0.168，TLR2的表达逐渐增强，各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。正常对照组、慢性乙肝组、肝衰竭早期组和中晚期组外周血单核细胞TLR4mRNA水平分别为0.512±0.092、0.685±0.135、0.946±0.176、0.826±0.156，肝衰竭早期组、中晚期组TLR4mRNA的表达要高于正常对照组(P＜0.01)，但相对于早期组，中晚期组TLR4mRNA的表达下降(P＜0.05)。
肝衰竭早期组和中晚期组患者外周血单核细胞TLR2mRNA表达与同组血TNF-α水平有明显相关性(分别r=0.865，P＜0.01:r=0.921，P＜0.01)，与同组血IL-6水平也有明显相关性(分别r=0.762，P＜0.01；r=0.851，P＜0.01)。肝衰竭早期组患者外周血单核细胞TLR4mRNA表达与血TNF-α、IL-6水平有明显相关性(分别r=0.917，P＜0.01；r=0.788，P＜0.01)，但在中晚期组与血TNF-α、IL-6水平无明显相关性(分别r=0.253，P＞0.05；r=0.185，P＞0.05)。
四、结论
肝衰竭患者外周血单核细胞TLR2mRNA和TLR4mRNA的表达上调，其中，TLR2mRNA的表达持续上调，而TLR4mRNA在肝衰竭早期上调，中晚期出现下调。外周血单核细胞TLR2mRNA和TLR4mRNA的表达上调与炎性细胞因子密切相关，提示TLR2和TLR4介导的炎症反应可能参与了肝衰竭的发病。