论文部分内容阅读
本论文主要研究工作如下：1.研制了一种基于介孔二氧化硅负载纳米金和适体DNA的免标记电化学传感器，用于检测凝血酶（thrombin）的含量。实验中，我们先用三甲基氯硅烷（TMCS）封闭介孔二氧化硅（MPS）前驱体外壁硅羟基的活性，煅烧除去模板剂后，再用氨基丙基三乙氧基硅烷（APTS）与孔道内壁硅羟基反应，接枝氨基，得到内壁修饰氨基的介孔硅材料（APTS-TMCS-MPS）。将介孔硅材料加入到氯金酸和硼氢化钠溶液中，由于介孔内壁氨基的影响，在孔内原位合成了金纳米粒子（GNPs），组装到介孔孔道内，得到了GNPs/APTS-TMCS-MPS。巯基修饰的适体DNA与GNPs/APTS-TMCS-MPS的金纳米粒子通过金硫键相结合，从而将DNA组装到介孔材料内部，制得免标记探针（DNA/GNPs/APTS-TMCS-MPS）。将探针修饰在玻碳电极（GCE）表面，制得免标记DNA电化学传感器。将该传感器与含有凝血酶的待测液温育反应后，凝血酶和固定在介孔内的适体DNA发生特异性反应，形成空间位阻较大的适体DNA和凝血酶的复合物，从而增加了介孔孔道内的空间位阻，导致电流信号降低。根据电流信号的降低，可以实现对凝血酶的免标记测定。实验结果表明，APTS-TMCS-MPS孔内的GNPs，可以提高孔道内电子的传递效率。在优化的实验条件下，该DNA电化学传感器对凝血酶的线性检测范围是1.0×10-8–1.0×10-6mol L-1，检测限是7.5×10-9mol L-1（3σ）。2.研制了一种基于Luminol-H2O2-HRP和CdSe化学发光共振能量转移体系的免标记化学发光免疫传感器，并用于检测肿瘤标志物甲胎蛋白（AFP）的含量。首先水相合成带羧基的CdSe量子点，通过CdSe的羧基基团与APTS-TMCS-MPS的氨基共价结合，使CdSe组装到介孔孔道内，形成CdSe/APTS-TMCS-MPS，然后将甲胎蛋白单克隆抗体（anti-AFP）固定在CdSe/APTS-TMCS-MPS介孔内部，制得免标记免疫探针（anti-AFP/CdSe/APTS-TMCS-MPS）。依次将辣根过氧化物酶（HRP）、过氧化氢（H2O2）和鲁米诺（Luminol）溶液加入到该免疫探针的悬浊液中，将该免疫探针的混合溶液与含有AFP的待测液温育反应后，AFP和固定在介孔内的anti-AFP发生特异性反应，形成空间位阻较大的免疫复合物，覆盖了CdSe的部分表面，从而削弱了孔道内部Luminol-H2O2-HRP和CdSe体系的共振能量转移作用，导致化学发光信号的降低。根据化学发光信号的降低，可以实现对AFP的免标记化学发光测定。在优化的实验条件下，AFP在5.0-100ng mL-1范围内呈线性相关，检测限为1.0ng mL-1(3σ)。