【摘 要】
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玻璃化冷冻法保存卵母细胞,不仅可以建立优良畜种卵母细胞库,实现快速繁殖,而且也是保护特殊或濒危物种的有效手段。本文旨在研究冷冻与未冷冻GV期驴卵母细胞培养至不同发育阶段基因表达及甲基化的差异,从而探究冷冻对驴卵母细胞损伤机制。本研究分别将GV期驴卵母细胞未冷冻(对照组)和玻璃化冷冻(实验组)体外成熟培养0 h、20 h与40 h,对六组样本分别进行单细胞转录组与单细胞甲基化测序分析,结果如下:1.
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玻璃化冷冻法保存卵母细胞,不仅可以建立优良畜种卵母细胞库,实现快速繁殖,而且也是保护特殊或濒危物种的有效手段。本文旨在研究冷冻与未冷冻GV期驴卵母细胞培养至不同发育阶段基因表达及甲基化的差异,从而探究冷冻对驴卵母细胞损伤机制。本研究分别将GV期驴卵母细胞未冷冻(对照组)和玻璃化冷冻(实验组)体外成熟培养0 h、20 h与40 h,对六组样本分别进行单细胞转录组与单细胞甲基化测序分析,结果如下:1.转录组测序分析筛选出与其发育密切相关差异表达基因15个。其中与核转录翻译相关基因分别是ZAR1L、DHX29、ELAC1、MED7、SOHLH2、DAZL;与线粒体功能相关基因分别是POLRMT、CDK5RAP1、TXNIP、SOD2;与纺锤体染色体组装相关基因分别是ERH、MAD2L1、CDK5RAP2-2;胞外基质作用相关基因分别是CPZ、GDF9。实验结果表明,上述15个基因差异表达可能与冻存卵母细胞发育率低相关。2.甲基化测序分析筛选出与卵母细胞分裂分化及细胞周期密切相关的基因3个,分别是WDR49、CSF3、MPF;实验结果表明玻璃化冷冻后3个基因甲基化水平均显著降低而转录水平升高,可能与冻存卵母细胞发育受阻有关。综上所述玻璃化冷冻可能影响驴卵母细胞与发育相关基因的表达和甲基化水平,进而导致卵母细胞发育异常或凋亡,研究为提高玻璃化冻存驴乃至哺乳动物卵母细胞成熟率及其受精胚发育率提供理论依据。
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