【摘 要】
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外泌体是体内外大多数细胞类型晚期核内体/多囊泡体与质膜融合后分泌到细胞外环境的30～150 nm的囊泡,是核内体起源的一种分泌囊泡,通过向受体细胞传递功能蛋白、核酸和脂质,参与信号传递过程,促进细胞间的交流,被认为在介导细胞间通讯中起作用,在多个研究中发现不同来源的外泌体对毛囊的发育有调节作用。因此,本研究以内蒙古阿尔巴斯绒山羊毛囊干细胞为研究对象,采用western blot和实时荧光定量PCR
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外泌体是体内外大多数细胞类型晚期核内体/多囊泡体与质膜融合后分泌到细胞外环境的30～150 nm的囊泡,是核内体起源的一种分泌囊泡,通过向受体细胞传递功能蛋白、核酸和脂质,参与信号传递过程,促进细胞间的交流,被认为在介导细胞间通讯中起作用,在多个研究中发现不同来源的外泌体对毛囊的发育有调节作用。因此,本研究以内蒙古阿尔巴斯绒山羊毛囊干细胞为研究对象,采用western blot和实时荧光定量PCR对褪黑素处理的毛囊干细胞的外泌体分泌和基因表达进行分析,旨在发现褪黑素对毛囊干细胞外泌体的影响情况与调控机理。主要研究结果如下:1.不同浓度褪黑素提高了毛囊干细胞的外泌体分泌量,通过western blot方法对外泌体的标志蛋白进行了检测,在500 pg/m L浓度褪黑素作用下,外泌体中含有的CD9、CD63、HSP70等外泌体标志蛋白显著高于对照组和其它浓度褪黑素组,证实了褪黑素使毛囊干细胞的外泌体具有异质性。2.对毛囊干细胞中外泌体合成调控信号通路的关键基因进行了检测,500pg/m L浓度褪黑素作用显著提高了外泌体合成基因HGS、VPS4a、ALIX、TSG101、ARF6、STAM、CD81的mRNA的表达。褪黑素受体拮抗剂能显著抑制褪黑素对毛囊干细胞中外泌体合成调控基因的影响,4-P效果更为显著,褪黑素可能通过受体2调控外泌体的合成。3.对毛囊干细胞中外泌体分泌调控信号通路的关键基因进行了检测,500pg/m L浓度褪黑素作用显著提高了外泌体分泌过程中MVB转运调节基因Rab7a、Rab11a、YKT6、Rab27a的mRNA的表达,同时也提高了该过程中MVB与质膜融合调控基因YKT6、VAMP3、VAMP7、VTI1A的mRNA的表达。褪黑素受体拮抗剂能显著抑制褪黑素对毛囊干细胞中外泌体分泌调控基因的影响,4-P效果更为显著,褪黑素可能通过受体2调控外泌体的分泌。
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