褪黑素可以抑制LPS诱导的HT-29细胞HMGB1表达

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目的:观察褪黑素对LPS诱导人结肠癌上皮细胞HT29的HMGB1的影响。方法:HT29细胞分为5组:空白对照组(CT组)、LPS对照组、62.5u M褪黑素+LPS组、125u M褪黑素+LPS组、250u M褪黑素+LPS组。分别培养24h和48h,用q RT-PCR法检测高迁移率族蛋白1(HMGB1)m RNA表达、ELISA法检测培养上清中HMGB1含量、免疫荧光法检测HMGB1在细胞核内外的分布情况。结果:与CT组相比,LPS组(浓度分别为1mg/ml、2.5mg./ml及5mg/ml)HMGB1m RNA表达水平升高(p<0.05),LPS+MT62.5(u M)组、LPS+MT125(u M)组、LPS+MT250(u M)组HMGB1m RNA表达减低,LPS+MT250组表达较前两组明显下降(p<0.05);LPS组(浓度分别为1mg/ml、2.5mg./ml及5mg/ml)上清液HMGB1含量高于CT组(P<0.05),LPS+MT62.5组、LPS+MT125组及LPS+MT250组HMGB1含量较LPS组减低,LPS+MT250组含量较前两组明显下降(p<0.05),褪黑素可抑制LPS诱导的HT29细胞分泌HMGB1,且随褪黑素浓度上升抑制效果越明显;免疫荧光染色显示HT29细胞中CT组HMGB1主要分布于细胞核内,使用LPS(2.5mg/ml)干预24h、48h后细胞质及细胞膜外的荧光表达量上升,LPS+MT62.5组、LPS+MT125组及LPS+MT250组HMGB1在细胞质及细胞膜外的荧光表达量随褪黑素浓度增加而下降(P<0.05),提示褪黑素可抑制HT29细胞内HMGB1的核-质转移,且呈计量效应,褪黑素浓度越高,抑制效果越好。结论:褪黑素能够抑制LPS诱导的HT29细胞HMGB1 m RNA转录和HMGB1的核-质转移。
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