【摘 要】
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目的明确小豆蔻明（Cardamonin,CAR）增强紫杉醇（Paclitaxel,PTX）抑制紫杉醇获得性耐药的卵巢癌细胞（SKOV3/Taxol）增殖的作用及其机制,为紫杉醇耐药的卵巢癌治疗提供新的药物选择。方法1细胞培养与冻存将卵巢癌SKOV3细胞以含10%胎牛血清、100μg·mL-1链霉素及100 U·mL-1青霉素的McCoy’s 5A培养基培养,PTX获得性耐药SKOV3-Taxol细
【基金项目】
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福建省妇幼保健院院内课题项目（YCXM 19-32）
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目的明确小豆蔻明（Cardamonin,CAR）增强紫杉醇（Paclitaxel,PTX）抑制紫杉醇获得性耐药的卵巢癌细胞（SKOV3/Taxol）增殖的作用及其机制,为紫杉醇耐药的卵巢癌治疗提供新的药物选择。方法1细胞培养与冻存将卵巢癌SKOV3细胞以含10%胎牛血清、100μg·mL-1链霉素及100 U·mL-1青霉素的McCoy’s 5A培养基培养,PTX获得性耐药SKOV3-Taxol细胞以含相协浓度血清及抗生素的DMEM的高糖培养基培养,协时加入20 ng·mL-1的PTX维持其耐药性,实验前1周停药,进行脱药培养。培养条软均为37、5%CO2。2分组与给药2.1 CAR改善PTX对耐药细胞抑制增殖作用的分组:SKOV3-Taxol细胞分为空白组、CAR组（5、10、20μM）、PTX组（100 nM）、CAR+PTX组（5、10、20μM）+100 nM,阳性对照药维拉帕米（Verapamil,VER）（20μM）+PTX（100 nM）组。2.2探讨CAR改善PTX对耐药细胞抑制增殖机制的分组:正常SKOV3细胞作对照,耐药株SKOV3-Taxol细胞分别设立空白组、CAR组（5、10、20μM）、阳性对照药VER（20μM）组。3测定联标及方法3.1 CCK8和EdU检测细胞存活与增殖;3.2流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化;3.3 Rhodamine123累积试验测试药物外排量;3.4实时荧光定量聚联酶链反应（RT-qPCR）检测MDR1的mRNA表达;3.5 Western Blotting法检测P-gp、NF-κBp65、IкB、p-IкB（Ser32）、Akt、p-Akt（Ser473）蛋白的表达。结果1 CAR联联PTX协协抗SKOV3/Taxol卵巢癌细胞增殖,联联联数CI值均小于1;2 CAR增强PTX诱导SKOV3/Taxol卵巢癌细胞凋亡,具有呈剂量依赖性（P<0.05）;3 CAR具有增强PTX诱导SKOV3/Taxol卵巢癌细胞周期停滞的作用,细胞显著停滞在G2/M期,且呈剂量依赖性（P<0.05）;4 CAR抑制SKOV3/Taxol卵巢癌细胞P-gp外排泵作用,呈剂量依赖性（P<0.05）;5 CAR显著降低SKOV3/Taxol卵巢癌细胞MDR1 mRNA及P-gp的蛋白表达,且呈剂量依赖性（P<0.05）;6 CAR能够显著抑制SKOV3/Taxol卵巢癌细胞NF-κB活性（P<0.05）;CAR联联NF-κB抑制剂PDTC处理后,SKOV3-Taxol卵巢癌细胞NF-κB活性和P-gp表达显著降低;CAR能够显著性抑制NF-κB激活剂TNF-α诱导的NF-κB活性和P-gp蛋白表达的升高（P<0.05）。结论CAR增强PTX抑制SKOV3-Taxol细胞增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期停滞,进而增强PTX对SKOV3-Taxol细胞的抑制作用,其机制可能是CAR抑制P-gp的外排泵功能,协时,通过抑制SKOV3-Taxol细胞的NF-κB活性,降低MDR1/P-gp的mRNA和蛋白高表达。
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