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目的:探讨脂肪来源的干细胞(adipose-derived stem cell,ADSC)移植对脑缺血大鼠的作用及其分子生物学机制,通过观察ADSC移植对脑缺血大鼠脑组织中微血管生成和碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达情况,为ADSC移植治疗脑缺血性疾病及其机理提供实验依据。方法:1、体外分离培养ADSC,流式细胞仪检测其表面标志。2、实验动物分组:大鼠随机分为假手术组(Sham组),局灶性脑缺血组(MCAO组),溶剂对照组(vehicle组)和MCAO +ADSC治疗组(ADSC组)。每组再分4 d、7 d、14 d三个亚组,每组6只。3、参考改良Zea-Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血模型。4、羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein succinimidyl ester,CFSE)体外标记ADSC。5、ADSC移植:ADSC组于造模成功1d后经侧脑室注射入ADSC(内含1×106细胞数),vehicle组注射等量磷酸缓冲盐溶液(phosphate-buffered saline,PBS)。6、取材与检测6.1术后4d、7d和14d大鼠大脑灌注、取材、切片。6.2荧光显微镜观察CFSE标记的ADSC在体内存活情况。6.3免疫组织化学法检测第VIII因子相关抗原表达情况。6.4半定量RT-PCR法和免疫组织化学法检测bFGF、TGF-β1和VEGF表达情况。6.5激光共聚焦显微镜观察CFSE标记的ADSC在体内分泌生长因子bFGF、TGF-β1和VEGF的情况。7、统计学分析。结果:1、ADSC组梗死灶周围的纹状体及额顶皮质下脑组织中可观察到CFSE标记的的阳性细胞。2、第VIII因子相关抗原免疫组织化学法结果显示大鼠脑缺血后缺血区即可见大量的微血管生成。ADSC组较MCAO组和vehicle组缺血区微血管密度明显增高(P<0.01)且随时间延长表达持续增多。3、半定量RT-PCR法和免疫组织化学法结果显示ADSC组bFGF、TGF-β1和VEGF的表达在各个时间点均明显高于MCAO组和vehicle组,差异具有统计学意义(P <0.01)。4、激光共聚焦显微镜显示脑缺血后经侧脑室移植的ADSC可达到脑缺血损伤处聚集、存活且可以分泌生长因子bFGF、TGF-β1和VEGF。结论:ADSC移植的脑保护作用可能与促进脑缺血区新生血管的生成及bFGF、TGF-β1和VEGF的表达有关。