花生是重要的油料作物之一,其生产受到盐胁迫的威胁,而应对盐胁迫的常规育种技术却存在各种问题,因此,研究耐盐的分子机制将为提高该作物的耐盐性提供重要信息。WRKY是植物中最大的转录因子（TF）家族之一,参与生长发育、防御调节和应激反应。本研究以花生品种“花育20”为材料,根据花生盐渍胁迫转录组分析,筛选出一个差异表达成员AhWRKY23,利用花粉管注射法将AhWRKY23基因导入花生获得转基因植株,并对其耐盐性进行了鉴定,初步证明该基因可以提高花生耐盐性,继而利用酵母双杂交技术筛选AhWRKY23候选互作蛋白。本课题组前期根据花生盐渍胁迫转录组分析,筛选出一个差异表达成员AhWRKY75,将其导入花生中,获得转基因植株,且通过生理生化指标的测定,初步证明该基因可以提高花生耐盐性,本研究拟在此基础上,利用酵母双杂技术筛选AhWRKY75候选互作蛋白,从而解析AhWRKY75基因调控花生耐盐性分子机制。主要结果如下:根据花生盐渍胁迫转录组分析,筛选出的差异表达基因AhWRKY23,其CDS全长为891 bp,基因全长为1 069 bp,编码1个296 aa的蛋白质。该基因具有3个外显子和2个内含子。将过表达的AhWRKY23基因转入花生中,进行盐处理,结果表明转基因花生在盐胁迫处理下比野生型生长更好。盐处理后,转基因株系的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）活性显著高于非转基因对照植株,转基因品系的丙二醛（MDA）和超氧阴离子（O2-）含量显著低于对照植株。同时,转基因植株的净光合速率（Pn）、气孔导度（Gs）和蒸腾速率（Tr）显著高于对照植株,胞间CO2浓度（Ci）显著低于对照植株。这些结果表明,AhWRKY23基因通过提高胁迫处理下活性氧清除系统的能力和光合作用的效率而提高转基因花生植株耐盐性。转录激活活性分析表明AhWRKY23全长具有转录激活活性,靠近N端213aa无转录激活活性。筛选酵母c DNA文库,获得9个拟互作蛋白。本课题组前期已初步证明AhWRKY75基因可以提高花生耐盐性。在本研究中亚细胞定位结果表明AhWRKY75蛋白定位于细胞核上。实验证明AhWRKY75全长具有转录激活活性,其WRKY结构域不具有转录激活活性,其转录激活结构域位于编码序列的C端。酵母双杂交实验表明AhWRKY75蛋白可能与MYB1蛋白互作,推测其共同调控转基因花生植株对盐胁迫的抗性。通过对盐渍胁迫转录组中耐盐性上调基因的启动子的分析,推测AhWRKY75通过与Ah LCIL6D启动子的W box元件结合来共同调节花生耐盐性。